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Cholesterol

胆固醇

Company: Sigma-Aldrich
Catalog#: C8667
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Liposome Flotation Assay for Studying Interactions Between Rubella Virus Particles and Lipid Membranes
Author:
Date:
2018-08-20
[Abstract]  Rubella virus (RuV) is an enveloped, positive-sense single-stranded RNA virus that is pathogenic to humans. RuV binds to the target cell via the viral envelope protein E1, but the specific receptor molecules on the target cell are yet to be fully elucidated. Here, we describe a protocol for liposome flotation assay to study direct interactions between RuV particles and lipid membranes in a qualitative manner. Interactions are examined by a Nycodenz density gradient fractionation using UV-inactivated RuV particles and fluorescent-labeled liposomes consisting of pure lipids. Fractionated RuV particles are detected using standard sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE) followed by Western blot analysis for viral proteins. On the Nycodenz gradient, RuV particles ... [摘要]  风疹病毒(RuV)是一种包膜的正义单链RNA病毒,对人类具有致病性。 RuV通过病毒包膜蛋白E1与靶细胞结合,但靶细胞上的特异性受体分子尚未完全阐明。在这里,我们描述了脂质体浮选测定的方案,以定性方式研究RuV颗粒和脂质膜之间的直接相互作用。使用UV-灭活的RuV颗粒和由纯脂质组成的荧光标记的脂质体通过Nycodenz密度梯度分级检查相互作用。使用标准十二烷基硫酸钠 - 聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)检测分级的RuV颗粒,然后对病毒蛋白进行Western印迹分析。在Nycodenz梯度上,与未结合的RuV颗粒相比,与脂质体结合的RuV颗粒转移至较低密度的部分。使用该方案,我们提供了令人信服的证据,即在中性pH下以钙依赖性方式,RuV颗粒与某些细胞类型中含有鞘磷脂(SM)和胆固醇的脂质膜结合。

【背景】 风疹病毒是“风疹”的致病因子,“风疹”是一种急性且相对轻微的全身性感染和“先天性风疹综合征”,一种导致严重出生缺陷的转胎胎儿感染(Hobman,2013)。阐明RuV进入的分子机制对于了解病毒病理学和帮助开发抗RuV药物是必不可少的。虽然以前的研究表明宿主细胞的膜脂质作为RuV受体(Mastromarino et al。,1989和1990; DuBois et ...

FRAP: A Powerful Method to Evaluate Membrane Fluidity in Caenorhabditis elegans
Author:
Date:
2018-07-05
[Abstract]  FRAP (Fluorescence Recovery After Photobleaching) is probably the most direct method to investigate the dynamics of molecules in living cells. Here, we describe FRAP to quantify membrane fluidity in C. elegans. Using FRAP, we have shown that cold, glucose and exogenous saturated fatty acids can decrease the fluidity of cellular membranes in certain mutants. [摘要]  FRAP(光漂白后的荧光恢复)可能是研究活细胞中分子动力学的最直接方法。 在这里,我们描述FRAP来量化 C中的膜流动性。线虫。 使用FRAP,我们已经表明冷,葡萄糖和外源饱和脂肪酸可以降低某些突变体中细胞膜的流动性。

【背景】生物膜,定义所有细胞的特征,主要由磷脂组成(Van Meer 等人,,2008)。存在于磷脂双层中的脂肪酸物质极大地影响其性质。例如,高饱和脂肪酸含量增加了膜的刚性,而高不饱和脂肪酸含量促进了流动性(Pilon,2016)。细胞膜的脂肪酸组成通常与膳食脂肪的组成明显相关,膳食脂肪可直接掺入磷脂中(Abbott et al。,2012; Dancy et al。,2015)。然而,考虑到饮食中存在广泛的变化,细胞必须具有调节机制,监测和调节膜组成并获得所需的膜性质,例如流动性,曲率,厚度,等等。使用FRAP对在肠道细胞中表达prenylated GFP的蠕虫,我们先前已经证明,缺乏PAQR-2(哺乳动物脂联素受体的同源物)的突变体在葡萄糖或富含饱和脂肪的饮食中培养时降低了膜流动性。酸(Svensk et al。,2016; Devkota et ...

Measurement of Intracellular ROS in Caenorhabditis elegans Using 2’,7’-Dichlorodihydrofluorescein Diacetate
Author:
Date:
2018-03-20
[Abstract]   Reactive oxygen species (ROS) are generated during normal metabolic processes under aerobic conditions. Since ROS production initiates harmful radical chain reactions on cellular macromolecules, including lipid peroxidation, DNA mutation, and protein denaturation, it has been implicated in a wide spectrum of diseases such as cancer, cardiovascular disease, ischemia-reperfusion and aging. Over the past several decades, antioxidants have received explosive attention regarding their protective potential against these deleterious reactions. Accordingly, many analytical methodologies have been developed for the evaluation of the antioxidant capacity of compounds or complex biological samples. Herein, we introduce a simple and convenient method to detect in vivo intracellular ROS ... [摘要]  在有氧条件下的正常代谢过程中产生活性氧物质(ROS)。 由于ROS产生会引起细胞大分子的有害自由基连锁反应,包括脂质过氧化反应,DNA突变和蛋白质变性,因此它已涉及多种疾病,如癌症,心血管疾病,缺血再灌注和衰老。 在过去的几十年中,抗氧化剂已经受到爆炸性的关注,因为它们对这些有害反应具有保护作用。 因此,已经开发了许多分析方法用于评估化合物或复杂生物样品的抗氧化能力。 在此,我们介绍了使用2',7'-二氯荧光素二乙酸盐(H 2),在线虫体内用光度计检测体内细胞内ROS水平的简单方便的方法。 DCFDA),一种细胞渗透性示踪剂。

【背景】已经广泛地使用荧光探针2',7'-二氯荧光素二乙酸酯(H 2 DCFDA)原位检测活体内细胞内活性氧簇(ROS)水平由在氧化应激和相关疾病领域工作的研究人员提供。非极性和非离子型探针H 2 DCFDA可以容易地穿透细胞膜并且被酯酶酶促脱乙酰化。该生物化学反应将H 2 DCFDA转化成非荧光化合物H 2 DCF,然后将其迅速氧化成高度荧光的2',7'-二氯荧光素(DCF) ROS的存在(图1A)。因此,来自H 2 ...

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