| Measurement of the Intracellular Calcium Concentration with Fura-2 AM Using a Fluorescence Plate Reader
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Author:
Date:
2017-07-20
[Abstract] Intracellular calcium elevation triggers a wide range of cellular responses. Calcium responses can be affected or modulated by membrane receptors mutations, localization, exposure to agonists/antagonists, among others (Burgos et al., 2007; Martínez et al., 2016). Changes in intracellular calcium concentration can be measured using the calcium sensitive fluorescent ratiometric dye fura-2 AM. This method is a high throughput way to measure agonist mediated calcium responses.
[摘要] 细胞内钙升高引发广泛的细胞反应。 钙响应可能受到膜受体突变，定位，暴露于激动剂/拮抗剂等的影响或调节（Burgos et al。，2007;Martínez等人，2016年））。 细胞内钙浓度的变化可以使用钙敏感荧光比例染料fura-2 AM测量。 该方法是测量激动剂介导的钙反应的高通量方法。
【背景】G蛋白偶联受体的激活触发了数百或数千个第二信使分子的产生。一旦被刺激，G蛋白偶联受体激活磷脂酶C（PLC），其将磷脂酰肌醇4,5-二磷酸酯（PIP 2 N）切割成二酰基甘油（DAG）和肌醇1 ，4,5-三磷酸酯（IP 3+）。 DAG保持膜结合，并且IP 3被释放到胞质溶胶中，其结合到内质网（ER）中的特异性IP 3'受体（钙通道）。这导致调节钙结合蛋白和蛋白激酶C（PKC）的激活的细胞内钙浓度的增加。因此，考虑到钙在生物系统中的重要性，已经建立了许多分析和测量Ca 2+水平的技术/方法。
＆NBSP;为确定细胞内Ca 2+浓度，荧光指示剂特别有用。 Ca 2 + 指示符可用于亲和力，亮度或光谱特性的变化。 Fura-2-乙酰氧基甲酯（fura-2 AM）是比例计算的钙指示剂fura-2的膜可渗透的非侵入性衍生物。 Fura-2 AM穿过细胞膜，一旦在细胞内，细胞酯酶除去乙酰氧基甲基。 Ca 2 + -bound fura-2 AM在335 ...
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| Determining the Influence of Small Molecules on Hypoxic Prostate Cancer Cell (DU-145) Viability Using Automated Cell Counting and a Cell Harvesting Protocol
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Author:
Date:
2016-11-20
[Abstract] Cell viability assays are an essential aspect of most cancer studies, however they usually require a considerable labor and time input. Here, instead of using the conventional microscopy and hemocytometer cell counting approach, we developed a cell harvesting protocol and combined it with the automated Countess Automated Cell Counter to generate cell viability data. We investigated the effects of dihydroxylated bile acids on the cell viability of prostate cancer cells grown under hypoxic conditions. We observed that for all conditions, cell viability was relatively unchanged, suggesting these molecules had little or no impact on cell viability. The combination of the automated approach and the cell harvesting protocol means this assay is i) easy to perform, ii) extremely reproducible and ...
[摘要] 细胞活力测定是大多数癌症研究的一个重要方面，然而，它们通常需要相当多的劳动和时间投入。在这里，而不是使用常规的显微镜和血细胞计数细胞计数方法，我们开发了一个细胞收获协议，并结合自动Countess自动细胞计数器生成细胞活力数据。我们调查二羟基化胆汁酸对缺氧条件下生长的前列腺癌细胞的细胞活力的影响。我们观察到，对于所有条件，细胞活力相对不变，表明这些分子对细胞活力几乎没有或没有影响。自动化方法和细胞收获方案的组合意味着该测定i）容易实施，ii）极其可重复，和iii）其补充更常规的癌症测定数据例如入侵，迁移和粘附。
[背景] 确定任何生物分子的治疗效用是开发新的分子治疗以抵抗癌症进展和发展的关键步骤。作为体外表征的初步步骤，必须评估分子作为抗癌治疗剂的适合性。作为该评估的一部分，细胞活力是小分子的细胞反应的关键决定因素，因为其反映分子维持阈值细胞活力的能力，同时靶向关键癌症进展机制例如。 ，集落性，侵袭和粘附。常规的生存力测定需要包括显微镜，血细胞计数器和手动细胞计数器的大量劳动输入。在这里，我们开发了快速和准确生成细胞活力数据的协议，将补充癌症研究研究（Phelan等人，2016）。
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| Organotypic Spinal Cord Slice Cultures and a Method to Detect Cell Proliferation in These Slices
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Author:
Date:
2016-10-05
[Abstract] In these culture models, the normal cytoarchitecture and local neuronal circuits of the spinal cord are preserved, offering a compromise between dissociated cell cultures and complete animal studies. The addition of 5-ethynyl-2’-deoxyuridine (EdU) to the culture medium allows for the detection of proliferating cells.
[摘要] 在这些文化模型中，保留了脊髓的正常细胞结构和局部神经元回路，提供了解离的细胞培养物和完全动物研究之间的折衷。 向培养基中加入5-乙炔基-2'-脱氧尿苷（EdU）允许检测增殖细胞。
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