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Penicillin/Streptomycin

青霉素 - 链霉素

Company: Sigma-Aldrich
Catalog#: P4333
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Primary Culture System for Germ Cells from Caenorhabditis elegans Tumorous Germline Mutants
Author:
Date:
2017-08-05
[Abstract]  The Caenorhabditis elegans germ line is an important model system for the study of germ stem cells. Wild-type C. elegans germ cells are syncytial and therefore cannot be isolated in in vitro cultures. In contrast, the germ cells from tumorous mutants can be fully cellularized and isolated intact from the mutant animals. Here we describe a detailed protocol for the isolation of germ cells from tumorous mutants that allows the germ cells to be maintained for extended periods in an in vitro primary culture. This protocol has been adapted from Chaudhari et al., 2016. [摘要]  秀丽隐杆线虫种系是胚芽干细胞研究的重要模型系统。 野生型C。 线虫生殖细胞是合胞体,因此不能在体外培养中分离。 相比之下,来自肿瘤突变体的生殖细胞可以完全被细胞化并从突变动物中完整分离。 在这里,我们描述了从肿瘤突变体中分离生殖细胞的详细方案,其允许生殖细胞在体外原代培养中长时间维持。 该协议已从2016年Chaudhari等人改编。
【背景】秀丽生殖细胞在位于两个性腺臂的远端区域的两个成体干细胞龛中产生(Hansen和Schedl,2013; Kimble和Seidel,2013)。在野生型雌雄同体中,有丝分裂生殖细胞仅限于性腺臂的远端,干细胞生态位。野生型生殖细胞是合胞体,并且包含延伸通过性腺臂中心区域的共同细胞质的开口。 ℃。线虫肿瘤种系突变体在整个性腺中增加了生殖细胞的有丝分裂增殖。我们发现肿瘤种系突变体通常具有完整的细胞生殖细胞,其含有完整的质膜(Chaudhari等人,2016)。这种细胞化允许生殖细胞的分离及其在培养中的维持。该方案描述了分离和维持培养物中肿瘤突变体的生殖细胞的方法学和组织培养基。虽然已经描述了用于C的主要培养物的培养基。 elegans 胚胎和幼虫细胞(Strange等人,2007; Zhang和Kuhn,2013),生殖细胞在这种培养基中不能存活(Chaudhari等人。 ...

EAE Induction by Passive Transfer of MOG-specific CD4+ T Cells
Author:
Date:
2017-07-05
[Abstract]  Experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE) is an animal model of multiple sclerosis (MS), which is a chronic inflammatory disease of the central nervous system (CNS). It is characterized by focal demyelination and inflammatory responses mediated by myelin-specific autoreactive CD4+ T cells. Using a passive transfer model of EAE in mice, we have demonstrated that regional specific neural signals by sensory-sympathetic communications create gateways for immune cells at specific blood vessels of the CNS, a phenomenon known as the gateway reflex (Arima et al., 2012; Tracey, 2012; Arima et al., 2013; Sabharwal et al., 2014; Arima et al., 2015b). Here we describe protocols for passive transfer model of EAE using freshly isolated (MOG)-specific ... [摘要]  实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)是多发性硬化症(MS)的动物模型,其是中枢神经系统(CNS)的慢性炎性疾病。其特征在于由髓磷脂特异性自身反应性CD4 + T细胞介导的局灶性脱髓鞘和炎症反应。在小鼠中使用EAE的被动转移模型,我们已经证明,通过感觉交感通信的区域特异性神经信号在CNS的特定血管上产生免疫细胞的网关,这被称为网关反射(Arima等, ,2012; Tracey,2012; Arima等人,2013; Sabharwal等人,2014; Arima等人。 >,2015b)。在这里,我们描述了使用新鲜分离的(MOG)特异性CD4 + T细胞或周期性再刺激的MOG特异性CD4 + T细胞系的EAE的被动转移模型的方案,其是适用于体内追踪致病性CD4 T细胞,特别是CNS(Ogura等人,2008; Arima等人) 。,2012和2015b)。
【背景】广泛接受的是,自身反应性CD4 + T细胞在MS和EAE的发病机理中起重要作用(Reboldi,2009; International Multiple Sclerosis Genetics,et al。,2011; Steinman,2014),它们是CNS的慢性炎性疾病。 ...

Physical Removal of the Midbody Remnant from Polarised Epithelial Cells Using Take-Up by Suction Pressure (TUSP)
Author:
Date:
2017-04-20
[Abstract]  In polarised epithelial cells the midbody forms at the apical cell surface during cytokinesis. Once severed, the midbody is inherited by one of the daughter cells remaining tethered to the apical plasma membrane where it participates in non-cytokinetic processes, such as primary ciliogenesis. Here, we describe a novel method to physically remove the midbody remnant from cells and assess the possible effects caused by its loss (Bernabé-Rubio et al., 2016). [摘要]  在极化上皮细胞中,胞质在细胞分裂过程中在顶端细胞表面形成。 一旦切断,中间体被遗留于其中参与非细胞运动过程(例如初级细胞发生)的顶端质膜的其中一个子细胞遗传。 在这里,我们描述了一种从细胞中物理去除中间体残留物并评估其损失所引起的可能影响的新方法(Bernabé-Rubio et al。,2016)。
【背景】中间体或Flemming体是在有丝分裂的最后阶段在子细胞之间形成的细胞间桥的中心部分。通过运输(ESCRT)机器所需的内体分选复合体,桥梁两侧的脱落导致两个子细胞的物理分离(Green等,2012)。除了其在有丝分裂调节中的已知功能外,最近的研究已经开始阐明中间体后有丝分裂后的作用。由于其在肾细胞中腔内形成的启动中的作用,中间体被假定为极性提示(Li等,2014)。最近,已经证明,中间体残留物通过极化的Madin-Darby犬肾(MDCK)细胞(Bernabé-Rubio等,2016)直接参与初级细胞发生。还发现在秀丽隐杆线虫(Singh and Pohl,2014)的发展过程中以及在确定细胞命运和分化过程中,形成背轴的作用(Kuo et al。,2011)。以前的研究使用激光消融来损害中间体残留的功能。然而,当在培养的细胞系中进行时,由于质膜和近端胞质元件的损伤,激光烧蚀可导致细胞死亡。因此,我们设计了一个温和的程序,我们称之为“抽吸压力”(TUSP)。 ...

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