| RNA Extraction from Ears and Draining Lymph Nodes of Mice Infected with Leishmania amazonensis
|
|
Author:
Date:
2020-06-05
[Abstract] Parasites of the genus Leishmania infect the mammalian hosts, including mice and humans and cause cutaneous or visceral leishmaniasis depending upon the parasite species transmitted by the vector sandfly. Leishmania amazonensis is one of the Leishmania species responsible for the cutaneous form of the disease. We have inoculated with these parasites the ear dermis of mice. RNA preparations were performed from fragmented tissues using a buffer containing guanidin isothiocynate (RLT buffer, RNeasy Mini Kit, Qiagen, SAS, France) and β-mercaptoethanol. Both reagents facilitate the isolation of intact RNA from tissues and the use of the RNeasy Kits present with several advantages that facilitate the isolation of pure non-degraded total RNA: i) This method allows to ...
[摘要] [摘要] 寄生虫 利什曼原虫感染哺乳动物宿主，包括小鼠和人类的原因皮肤或内脏Leishm Aniasis根据在转交了该载体的寄生虫种类白蛉。利什曼原虫亚马孙是的利什曼原虫物种负责对皮肤型疾病。我们已经接种这些RNA制备物从零散组织用含有缓冲液中进行guanidin 异硫氰酸（RLT缓冲液，RNeasy Mini试剂盒，Qiagen公司，SAS，法国）和β - 巯基乙醇。 两种试剂促进完整的RNA的从组织中分离，并与促进纯非恶化的总RNA的分离几个优点使用RNeasy试剂试剂盒本的：我）Ť 他的方法允许避免苯酚的在RNA提取存在缓冲液，通常在备选方案中使用;ⅱ）此外焦碳酸二乙酯（DEPC）处理的玻璃器皿，以避免RNA酶的样品的污染，不与该协议所需的;ⅲ）˚F inally，它是一个快速的过程和分离的总RNA可将其浓缩在小体积中，以利于其用于下游实验程序。
[背景] 属的病原体利什曼出生动物传染病与多种临床表现和疾病严重程度可变性的原因矢量（曼索托等人，2007）利什曼病的皮肤.The形式是由几个引起利什曼原虫种包括利什曼原虫亚马孙（麦克马洪-Pratt and Alexander，2004; Christensen et al。，2019）。
小鼠模型的存在，对皮肤利什曼病的敏感性高，中度或无敏感性，促进了寄生虫传播实验规程的发展（de ...
|
|
|
| Genotyping-free Selection of Double Allelic Gene Edited Medaka Using Two Different Fluorescent Proteins
|
|
Author:
Date:
2017-12-20
[Abstract] This protocol describes a simple genotyping using two different colors of fluorescent protein genes inserted at the target locus. This method makes it possible to determine the genotype of each individual simply by observing the fluorescence later than F1 generation.
[摘要] 该协议描述了使用两种不同颜色的荧光蛋白基因插入目标基因座的简单基因分型。这种方法可以简单地通过观察比F1代更晚的荧光来确定每个个体的基因型。
【背景】由于基因组编辑动物的常规基因分型在很大程度上取决于基于PCR的基因分型，所以有必要提取基因组DNA。在青aka中，尾鳍是一种易于再生的组织，因此经常用于基因分型以保持鱼的活力。要切断尾鳍，必须喂鱼几周，使其长得足够大（体长约1厘米）。喂养和照顾许多鱼费时费力。因此，希望减少繁殖早期如胚和早期幼虫的鱼的数量，以减少任务。然而，由于胚胎和幼虫的尾鳍太小而脆弱，因此很难将它们活下来。为了克服这个问题，基因分型的一个简单和非侵入性的方法是必不可少的。因此，我们开发了一种新的方法，只需通过观察荧光就可以无创地确定每个胚胎期的基因型。我们在基因敲入实验中证实了该方法的益处，该实验针对在受精后4天（dpf）（Murakami）在中枢神经系统（CNS）中表达的生长相关蛋白43（ gap43 et al 。，2017）。这个基因适用于基因敲入实验，因为在先前的研究中，已经通过RT-PCR和原位杂交揭示了其时空表达模式（Fujimori等， 。，2008）。如果野生型靶基因的表达模式是未知的，则需要通过RT-PCR或任何其他技术来分析，以证实其与基因敲入菌株中报道基因的对应性。
|
|
|
| Transwell Co-culture of Bone Marrow Macrophages with Tumor Cells
|
|
Author:
Date:
2014-05-05
[Abstract] Bone is a primary site of metastasis from prostate and breast cancers. Bone marrow macrophages (BMMs) are mediators of inflammatory processes and are thought to promote tumor growth in the skeletal sites. In order to elucidate how their interactions with tumor cells impact aggressiveness of metastatic tumors in bone in vitro methods are required. By employing a system in which BMMs and tumor cells are grown separately, yet share the media and exchange soluble factors, contribution of each cell type in the context of BMM-tumor cell relationship in the bone marrow can be investigated. Additional advantages of this system include the ability to study: 1) phenotypic changes in BMMs and tumor cells upon co-culture; 2) cell-specific modulation of protein and gene expression; and 3) ...
[摘要] 骨是来自前列腺和乳腺癌的原发转移部位。骨髓巨噬细胞（BMM）是炎症过程的介质，并且被认为促进骨骼部位中的肿瘤生长。为了阐明它们与肿瘤细胞的相互作用如何影响骨髓中转移性肿瘤的侵袭性，需要体外方法。通过采用其中BMM和肿瘤细胞分开生长，但共享培养基和交换可溶性因子的系统，可以研究在骨髓中BMM-肿瘤细胞关系的上下文中每种细胞类型的贡献。该系统的另外的优点包括研究以下的能力：1）共培养时BMM和肿瘤细胞中的表型改变; 2）蛋白质和基因表达的细胞特异性调节;和3）对增殖和细胞存活的影响。值得注意的是，该transwell共培养系统不限于BMM和肿瘤细胞，并且可以容易地修饰以包括骨髓微环境的其他组分（例如，脂肪细胞，基质细胞，成骨细胞）。
|
|
|