| Ex vivo Culture Assay Using Human Hair Follicles to Study Circadian Characteristics
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Author:
Date:
2020-06-05
[Abstract] Ex vivo culture assays of biopsy specimens are advantageous for the experimental evaluation of human circadian characteristics. We developed a simple and non-invasive experimental evaluation method for monitoring the expression of circadian clock genes in an ex vivo culture assay using human hair follicles. This method imposes little burden on subjects. This assay is useful for validating correlations between circadian characteristics in hair follicles and intrinsic characteristics observed in physiological and behavioral studies. While they should be further validated, this ex vivo method constitutes a useful tool for estimating in vivo circadian characteristics.
[摘要] [摘要] 活检标本的体外培养测定法有利于人体昼夜节律特征的实验评估。我们开发了一种简单而无创的实验评估方法，用于监测人发体外培养法中昼夜节律基因的表达follicles.This方法强加subjects.This测定法是用于验证昼夜CH之间的相关性有用的小负担在毛囊和固有特性在生理和行为studies.While观察aracteristics它们应该被进一步验证，该离体方法用于小的有用工具体内估计 昼夜节律特征。
[背景] 活的生物体表现出在生理和行为的昼夜节律由生物钟驱动（杨和Kay，2001）。该昼夜发条由转录的细胞自主性和时钟基因驱动的负反馈环路（邓拉普，1999 ）。在哺乳动物中，转录因子BMAL1和CLOCK 通过E-box元件激活时钟和与时钟相关的基因（例如Period （Per ）和Cryptochrome （Cry ））的转录.PER与有效的转录抑制剂CRY一起起作用负性调节这一复杂（里珀特织女，2002年）。在体内评估个体的内在节律特点在人类，要么以恒定的例行或强制去同步化协议，价格昂贵，耗力。因此，评估利用离体培养试验中要估计体内的昼夜节律特征可能具有重要的优势。例如，一些研究已经结束，n个外周细胞反映了个体的昼夜节律偏好，称为计时型（Brown 等人，2005； Hida 等人，2013 ...
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| Brain Tissue Culture of Per2::Luciferase Transgenic Mice for ex vivo Bioluminescence
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Author:
Date:
2018-07-05
[Abstract] In circadian research, it is essential to be able to track a biological rhythm for several days with the minimum perturbation for the organisms or tissues. The use of transgenic mice lines, in which the luciferase reporter is coupled to a molecular clock protein (here PERIOD2), gives us the opportunity to follow the circadian activity in different tissues or even single clock cells for days without manipulation. This method creates sections using a mouse brain matrix, which allows us to obtain several brain samples quickly at a single time point.
[摘要] 在昼夜节律研究中，能够以最小的生物或组织扰动跟踪生物节律数天是至关重要的。 使用转基因小鼠系，其中荧光素酶报告基因与分子钟蛋白（此处为PERIOD2）偶联，使我们有机会在不经操作的情况下跟踪不同组织或甚至单个时钟细胞中的昼夜节律活动数天。 该方法使用鼠标脑矩阵创建切片，这允许我们在单个时间点快速获得几个脑样本。
【背景】昼夜节律是大约24小时循环的行为或分子变化，并且在没有任何外部线索的情况下持续。在哺乳动物中，运动活动，体温和激素释放是昼夜节律的实例，其在位于下丘脑的视交叉上核（SCN）时钟的控制下。 SCN细胞保持内源性节律的能力是由于时钟基因表达的正负循环组成的分子机制：首先，CLOCK和BMAL1蛋白异二聚化通过E-box位点激活不同基因的转录关于基因如 period （ Per1-3 ）和隐花色素（ Cry1-2 ; Takahashi）的启动子 et al。，2008）。然后，PERIOD和CRYPTOCHROME的蛋白质异二聚化并返回到细胞核以防止BMAL1与E-Box结合。因此，PERIOD和CRYPTOCHROME抑制其自身的转录（Takahashi et al。，2008）。第二个环由类视黄醇相关的孤儿受体（ROR）和Rev-Erb组成：ROR蛋白激活 Bmal1 基因，而REV-ERB蛋白抑制它通过 ROR反应 Bmal1 ...
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| Measurement of the Intracellular Calcium Concentration with Fura-2 AM Using a Fluorescence Plate Reader
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Author:
Date:
2017-07-20
[Abstract] Intracellular calcium elevation triggers a wide range of cellular responses. Calcium responses can be affected or modulated by membrane receptors mutations, localization, exposure to agonists/antagonists, among others (Burgos et al., 2007; Martínez et al., 2016). Changes in intracellular calcium concentration can be measured using the calcium sensitive fluorescent ratiometric dye fura-2 AM. This method is a high throughput way to measure agonist mediated calcium responses.
[摘要] 细胞内钙升高引发广泛的细胞反应。 钙响应可能受到膜受体突变，定位，暴露于激动剂/拮抗剂等的影响或调节（Burgos et al。，2007;Martínez等人，2016年））。 细胞内钙浓度的变化可以使用钙敏感荧光比例染料fura-2 AM测量。 该方法是测量激动剂介导的钙反应的高通量方法。
【背景】G蛋白偶联受体的激活触发了数百或数千个第二信使分子的产生。一旦被刺激，G蛋白偶联受体激活磷脂酶C（PLC），其将磷脂酰肌醇4,5-二磷酸酯（PIP 2 N）切割成二酰基甘油（DAG）和肌醇1 ，4,5-三磷酸酯（IP 3+）。 DAG保持膜结合，并且IP 3被释放到胞质溶胶中，其结合到内质网（ER）中的特异性IP 3'受体（钙通道）。这导致调节钙结合蛋白和蛋白激酶C（PKC）的激活的细胞内钙浓度的增加。因此，考虑到钙在生物系统中的重要性，已经建立了许多分析和测量Ca 2+水平的技术/方法。
＆NBSP;为确定细胞内Ca 2+浓度，荧光指示剂特别有用。 Ca 2 + 指示符可用于亲和力，亮度或光谱特性的变化。 Fura-2-乙酰氧基甲酯（fura-2 AM）是比例计算的钙指示剂fura-2的膜可渗透的非侵入性衍生物。 Fura-2 AM穿过细胞膜，一旦在细胞内，细胞酯酶除去乙酰氧基甲基。 Ca 2 + -bound fura-2 AM在335 ...
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