| Isolation and Cultivation of Primary Brain Endothelial Cells from Adult Mice
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Author:
Date:
2017-05-20
[Abstract] Brain endothelial cells are the major building block of the blood-brain barrier. To study the role of brain endothelial cells in vitro, the isolation of primary cells is of critical value. Here, we describe a protocol in which vessel fragments are isolated from adult mice. After density centrifugation and mild digestion of the fragments, outgrowing endothelial cells are selected by puromycin treatment and grown to confluence within one week.
[摘要] 脑内皮细胞是血脑屏障的主要组成部分。 为了研究脑内皮细胞在体外的作用，原代细胞的分离是临床价值。 在这里，我们描述了一种方案，其中血管片段与成年小鼠分离。 在密度离心和片段的温和消化后，通过嘌呤霉素处理选择出生长的内皮细胞，并在一周内生长至汇合。
【背景】血脑屏障保护大脑免受细胞和物质的不受控制的侵入。 这主要是由脑内皮细胞形成的屏障组成的紧密和粘附连接限制细胞旁运输。
该方案被开发以克服维持其关键特征的小鼠脑内皮细胞系的有限可用性，例如表达足够量的紧密连接蛋白如闭合蛋白，ZO-1或紧密连接蛋白-5以诱导高跨内皮细胞抗性。
此外，从内含基因修饰的小鼠中分离脑内皮细胞可以在体外研究基因特异性功能。
使用这种方法，我们以前补充了体内研究，证明NF-κB信号在脑内皮细胞中维持正常血脑屏障功能的重要性（Ridder等，2015）。
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| Physicochemical Quantification of Abscisic Acid Levels in Plant Tissues with an Added Internal Standard by Ultra-Performance Liquid Chromatography
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Author:
Date:
2015-09-20
[Abstract] The phytohormone abscisic acid (ABA) is critical for a range of plant responses to the environment, most importantly in closing the stomata of seed plants during drought (Mittelheuser and Van Steveninck 1969; Brodribb et al. 2014). The high precision quantification of this hormone by physicochemical methods is a relatively simple process, essential for studies that aim to investigate the role or action of this hormone in plants. Outlined here is a method for the extraction, purification and quantification of ABA levels in plant tissues. This method involves methanolic extraction of ABA from homogenised tissue. Purification of ABA is then undertaken by a simple etheric partitioning method. A focus is placed on determining ABA levels in leaves; however this method is suitable for ...
[摘要] 植物激素脱落酸（ABA）对于一系列植物对环境的反应至关重要，最重要的是在干旱期间闭合种子植物的气孔（Mittelheuser和Van Steveninck 1969; Brodribb等人2014） 。 通过物理化学方法对这种激素的高精度定量是一个相对简单的过程，对于旨在研究该激素在植物中的作用或作用的研究是必要的。 这里概述了用于提取，纯化和定量植物组织中ABA水平的方法。 该方法包括从匀浆组织中甲醇提取ABA。 然后通过简单的以太分区方法进行ABA的纯化。 重点放在确定叶中的ABA水平; 然而该方法适用于所有组织类型，包括植物溶质如木质部汁液，种子（干的和绿色的）和组织的大样品例如根系统。
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| Agrobacterium-mediated Transformation of Strawberry
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Author:
Date:
2014-01-05
[Abstract] Traditional breeding for improvement of strawberry (Fragaria x ananassa) is difficult because strawberry is an octoploid, hybrid species. Genetic modification of strawberry would though be a promising alternative for obtaining the desired improvements in existing elite strawberry cultivars (Schaart et al., 2011). The availability of suitable genes for trait improvements in strawberry has however been a rate-limiting step until recently, but with the completion of the sequencing of the genome of woodland strawberry (F. vesca) (Shualev et al., 2011), we now have access to a treasure chest with valuable candidate genes. For strawberry, methods for genetic transformation have originally been described by Nehra et al. (1990) and James et al. ...
[摘要] 由于草莓是八倍体，杂种物种，用于改善草莓（ Fragaria x ananassa ）的传统育种是困难的。草莓的遗传修饰虽然是获得现有的优良草莓栽培品种所期望的改进的有希望的替代方法（Schaart等人，2011）。然而，随着草地草莓基因组测序的完成（Shualev ），用于草莓中性状改善的合适基因的可用性是速率限制步骤 et al。，2011），我们现在可以获得宝贵的候选基因宝库。对于草莓，遗传转化的方法最初由Nehra等人（1990）和James等人（1990）描述，并且转化的成功被证明是高度的品种依赖。草莓转化的最新进展由Husaini等人审查（2011）。在我们的实验室中，草莓的转化是基于由Passey等人（2003）描述的苗再生方法和使用超强毒力土壤杆菌菌株AGL0（Lazo et al。，1991）。我们主要利用草莓转化作为候选基因功能分析的工具。为此，栽培品种Calypso是非常合适的基因型，因为其高转化效率（高达100％）和永不结实的特性，一旦植物开始开花，其提供草莓果实的连续供应。
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