| In vitro Assays for the Detection of Calreticulin Exposure, ATP and HMGB1 Release upon Cell Death
|
|
Author:
Date:
2016-12-20
[Abstract] Accumulating evidence is revealing the essential role of immune system in cancer treatment. Certain chemotherapeutic drugs can potently induce the release of ‘cell death associated molecular patterns’ (CDAMPs), which accompanies cancer cell demise. CDAMPs can engage corresponding receptors on immune cells and stimulate immune responses to achieve long-term tumor control (Ma et al., 2013; Ma et al., 2014; Yang et al., 2015). Among reported CDAMPs, calreticulin (CALR), ATP and HMGB1 are well known for their immune-stimulatory effect. Here we describe the assays that we applied to measure cell death and these CDAMPs. Briefly, cell death can be analyzed by co-staining of 4’,6-diamidino-2-phenylindole (DAPI) with 3,3’-Dihexyloxacarbocyanine Iodide [DiOC6(3)] or ...
[摘要] 积累的证据表明免疫系统在癌症治疗中的重要作用。某些化学治疗药物可以有效诱导伴随癌细胞死亡的“细胞死亡相关分子模式”（CDAMPs）的释放。 CDAMP可以与免疫细胞上的相应受体结合并刺激免疫应答以实现长期的肿瘤控制（Ma等，2013; Ma等人，2014; Yang＆ em>等，，2015）。在所报道的CDAMP中，钙网蛋白（CALR），ATP和HMGB1是众所周知的免疫刺激作用。在这里我们描述我们应用于测量细胞死亡和这些CDAMPs的测定。简单地说，细胞死亡可以通过4'，6-二脒基-2-苯基吲哚（DAPI）与3,3'-二氧基氧羰基花青氨基碘[DiOC6（3）]或Annexin V的共染色来分析。通过流式细胞术检测。 ATP和HMGB1释放可以通过发光测定和ELISA测定分别进行定量。
背景 乳酸脱氢酶测定和台盼蓝染色是检测细胞死亡的传统方法。我们在这里描述两种可行和经济的解决方案，以通过流式细胞术（FCM）检测凋亡和坏死细胞死亡。 DAPI标记具有破坏完整性（坏死）的细胞，而膜联蛋白V结合磷脂酰丝氨酸（其在凋亡后被外化）。 DiOC6（3）摄取表明线粒体跨膜电位（MTP），MTP的崩解显示凋亡。 DAPI不需要补偿藻红蛋白（PE，其与膜联蛋白V蛋白结合）或DiOC6（3），因此在这些测定中显示优于碘化丙啶（PI）的优点。 ...
|
|
|
| A 3D Culture System of Human Immortalized Myometrial Cells
|
|
Author:
Date:
2016-10-20
[Abstract] Myometrium forms the middle layer of the uterus and is mainly composed of the smooth muscle cells. The cells in vitro are usually grown in a single layer (2-dimensional; 2D) format, whereas in vivo cells are structured in an extracellular matrix scaffolding that allows the cells to communicate and respond to environmental cues. We have developed human myometrium and leiomyoma 3-dimensional (3D) culture, wherein the cells retain their molecular characteristics and respond to environmental cues (Malik and Catherino, 2012; Malik et al., 2014).
[摘要] 子宫肌层形成子宫的中间层，主要由平滑肌细胞组成。细胞在体外通常生长在单层（2维; 2D）格式中，而体内细胞在细胞外基质支架中结构化，其允许细胞沟通和响应环境线索。我们已经开发了人子宫肌瘤和平滑肌瘤3维（3D）培养物，其中细胞保留其分子特征并响应环境线索（Malik和Catherino，2012; Malik等人，2014）。 br /> [背景] 在过去十年中，随着更多实验室从使用人工2D格式的细胞培养转移到3D细胞培养模型系统，观察到一定的转变，其中细胞生长在允许它们附着并获得更生理结构的基质中。该模型系统为细胞提供更自然的分化状态，并且培养的细胞在体内形成组织样环境。这是一个详细的协议为myometrium 3D细胞培养生长胶原-1矩阵，修改从Malik和Catherino（2012年）。
|
|
|
| A Simple Protocol for the Immunolabelling of Arabidopsis Pollen Tube Membranes and Cell Wall Polymers
|
|
Author:
Date:
2015-06-20
[Abstract] The pollen tube, a fast tip-growing cell, is an excellent model to study membrane and cell wall biosynthesis. Here, we describe a simple protocol using an easy to use device to perform immunofluorescence labelling of pollen tube membrane and cell wall. The use of the NucleoSpin column to perform all the steps of the immunolabelling procedure results in obtaining more intact pollen tubes.
[摘要] 花粉管，一种快速尖端生长细胞，是研究膜和细胞壁生物合成的优秀模型。 在这里，我们描述了一个简单的协议使用易于使用的设备进行免疫荧光标记花粉管膜和细胞壁。 使用NucleoSpin柱进行免疫标记过程的所有步骤导致获得更完整的花粉管。
|
|
|