| Cell Synchronization by Double Thymidine Block
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Author:
Date:
2018-09-05
[Abstract] Cell synchronization is widely used in studying mechanisms involves in regulation of cell cycle progression. Through synchronization, cells at distinct cell cycle stage could be obtained. Thymidine is a DNA synthesis inhibitor that can arrest cell at G1/S boundary, prior to DNA replication. Here, we present the protocol to synchronize cells at G1/S boundary by using double thymidine block. After release into normal medium, cell population at distinct cell cycle phase could be collected at different time points.
[摘要] 细胞同步广泛用于研究涉及细胞周期进程调节的机制。 通过同步，可以获得不同细胞周期阶段的细胞。 胸苷是一种DNA合成抑制剂，可在DNA复制前阻止细胞在G1 / S边界。 在这里，我们提出了使用双胸苷阻滞同步G1 / S边界细胞的协议。 释放到正常培养基中后，可以在不同的时间点收集不同细胞周期阶段的细胞群。
【背景】细胞周期和细胞分裂是细胞生物学的核心。为了构建多细胞生物体，细胞复制对于产生可以执行特定功能的特化细胞是必需的。正常细胞周期由间期（G1期，S期和G2期）和有丝分裂期（M期）组成（Rodríguez-Ubreva et al。，2010;Léger et al。 ，2016）。在间期期间，遗传物质被复制并使一切为有丝分裂做好准备。然而，在有丝分裂期，重复的染色体被分离并分配到子细胞中（Sakaue-Sawano 等人，，2008）。
为了精确保存遗传信息，必须严格控制细胞周期进程。细胞周期蛋白/ CDK复合物通过在各自阶段快速促进活动来控制细胞周期进展，并且当它们的阶段完成时迅速失活（Graña和Reddy，1995）。
细胞同步对于研究细胞周期调节事件特别有用。使用不同的方法，细胞可以在不同的细胞周期阶段同步。治疗作为微管形成抑制剂的诺考达唑可以使细胞处于G2 / M期同步（Ho et ...
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| Isolation and Expansion of Mesenchymal Stem Cells from Murine Adipose Tissue
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Author:
Date:
2017-08-20
[Abstract] Mesenchymal stem cells (MSCs) are currently intensively studied due to significant promise which they represent for successful implementations of future cell therapy clinical protocols. This in turn emphasizes importance of careful preclinical studies of MSC effects in various murine disease models. The appropriate cell preparations with reproducible biological properties are important to minimize variability of results of experimental cell therapies. We describe here a simple protocol for isolation of murine MSCs from adipose tissues and their reproducible multi-log expansion under hypoxia conditions.
[摘要] 间充质干细胞（MSC）目前正在深入研究，因为它们代表未来细胞治疗临床方案的成功实施的重大前景。 这又强调了对各种鼠疾病模型中MSC效应的仔细临床前研究的重要性。 具有可重现的生物学性质的合适的细胞制剂对于最小化实验细胞疗法结果的变异性是重要的。 我们在这里描述了一种用于从脂肪组织中分离鼠MSC的简单方案及其在缺氧条件下的可重复的多对数扩增。
【背景】最初由Friedenstein鉴定的MSC是成纤维细胞样形态的骨髓细胞，粘附于塑料和高自我更新能力，导致体外成纤维细胞样集落的形成（Friedenstein等，1976; Review in Phinney andSensebé ，2013）。 MSCs由于其在医学上的潜在应用，目前是研究最成熟的成体祖细胞类型之一。这些细胞可以从各种器官中分离（Murray等，2014），并且被认为是源于血管，以周细胞或血管壁细胞。除了能够沿着成骨，脂肪形成和软骨形成谱系分化的能力之外，MSC具有免疫调节特性，并且被认为参与对组织损伤的反应，以及通过其影响巨噬细胞极化的能力来组织抗炎反应（Prockop，2013; Caplan，2016）。
鉴于这些特性，MSCs代表了未来相关细胞治疗临床方案的成功实施的巨大前景。这反过来强调了在各种鼠疾病模型中使用MSC进行仔细临床前研究的重要性。制备大量具有可重复生物学特性的合适细胞样品的能力对于在开发基于MSC的实验细胞疗法期间最小化结果的变异性至关重要。然而，与具有强抗氧化防御性并因此在大气氧条件下相当好的人类MSC不同，小鼠MSC对氧应激更敏感，并且在常规CO2培养箱中培养时具有有限的寿命和扩张能力。相反，在缺氧条件下培养这些细胞，相反，显着延长了它们的寿命，并允许多对数扩增，提供足够量的具有可重复性质的细胞材料，用于用鼠实验疾病模型重复实验（Boregowda等，2012; ...
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| Mimicking Angiogenesis in vitro: Three-dimensional Co-culture of Vascular Endothelial Cells and Perivascular Cells in Collagen Type I Gels
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Author:
Date:
2017-04-20
[Abstract] Angiogenesis defines the process of formation of new vascular structures form existing blood vessels, involved during development, repair processes like wound healing but also linked to pathological changes. During angiogenic processes, endothelial cells build a vascular network and recruit perivascular cells to form mature, stable vessels. Endothelial cells and perivascular cells secret and assemble a vascular basement membrane and interact via close cell-cell contacts. To mimic these processes in vitro we have developed a versatile three-dimensional culture system where perivascular cells (PVC) are co-cultured with human umbilical cord vascular endothelial cells (HUVEC) in a collagen type I gel. This co-culture system can be used to determine biochemical and cellular processes ...
[摘要] 血管发生定义了形成现有血管的新血管结构的形成过程，涉及发育过程中的修复过程，如伤口愈合，还与病理变化有关。 在血管生成过程中，内皮细胞建立血管网络并招募血管周围细胞以形成成熟稳定的血管。 内皮细胞和血管周围细胞秘密并组装血管基底膜，并通过细胞间接触进行相互作用。 为了体外模拟这些过程，我们开发了一种通用的三维培养系统，其中血管周围细胞（PVC）与胶原I型凝胶中的人脐带血管内皮细胞（HUVEC）共培养。 这种共培养系统可用于通过广泛的分析选项来确定新生血管生成事件期间的生物化学和细胞过程。
【背景】内皮细胞和血管周围细胞之间的协调相互作用对于根据给定组织内的局部需要形成稳定的血管网是非常重要的。多个分子组分有助于相互作用，但仍然很少了解。需要各种生长因子来吸引内皮细胞到低氧浓度的位点，并建立新的血管，然后被血管周围细胞覆盖。两种细胞类型相互作用以分泌特定的细胞外基质并稳定新形成的血管。在过去已经建立了多个测定法来分析二维基质胶底物上的血管细胞相互作用和血管样网络形成，但是这些测定在三维细胞内提供关于血管内血管周围细胞相互作用和血管基底膜形成的初始步骤的信息是有限的维度微环境。此外，缺乏适合于培养实验的良好表征的血管周围细胞。
我们以前分离出具有血管周围特征的细胞，因为它们表达周细胞特异性标记，产生和分泌细胞外基质蛋白并在体内刺激血管生成过程（Brachvogel等，2005和2007）。这些细胞用于与人脐静脉内皮细胞建立共培养系统，并研究三维微环境中两种细胞类型相互作用后新生血管发生的关键步骤（Pitzler等，2016; ...
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