| Intravenous Labeling and Analysis of the Content of Thymic Perivascular Spaces
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Author:
Date:
2018-03-05
[Abstract] Following development in the thymus, T cells are thought to exit into the periphery predominantly through perivascular spaces (PVS). This exit route is used by conventional T cells, and likely also applies to unconventional T cell subsets, such as precursors of CD8αα and TCRγδ intraepithelial lymphocytes, regulatory T cells and natural killer T cells. Additional cell types might also be found in the PVS and initiate interactions with exiting T cells. The exact content of the PVS, and the processes within, are not well studied. To distinguish vascular from resident cells within various tissues by flow cytometry, intravenous (i.v.) labeling is becoming a commonly employed method. We recently used anti-CD45.2 antibodies and magnetic enrichment to further evaluate this technique, and compared ...
[摘要] 在胸腺发育后，T细胞被认为主要通过血管周围间隙（PVS）进入周边。 这种退路由常规T细胞使用，也可能适用于非常规T细胞亚群，例如CD8αα和TCRγδ上皮内淋巴细胞的前体，调节性T细胞和天然杀伤T细胞。 其他细胞类型也可能在PVS中发现并启动与退出T细胞的相互作用。 PVS的确切内容及其内部过程尚未得到充分研究。 为了通过流式细胞术将血管与各种组织中的驻留细胞区分开，静脉内（静脉内）标记正在成为常用方法。 我们最近使用抗CD45.2抗体和磁性富集来进一步评估这种技术，并比较胸腺和血液中的标记和未标记的细胞。 该测定可用于特异性研究胸腺PVS内的造血细胞亚群。
【背景】未成熟的胸腺细胞经历一系列成熟步骤，包括正向和负向选择，其消除了大部分发育中的T细胞。由此产生的成熟T细胞库因此形成朝向更高比例的有益克隆和减少比例的危险自反应克隆。胸腺还产生较少丰富的T细胞亚群，其通常用于维持免疫系统，组织和代谢稳态，包括：TCRγδ细胞，调节性T细胞（Treg），自然杀伤T细胞（NKT），上皮内淋巴细胞（IEL）和粘膜相关不变T（MAIT）细胞。成熟的胸腺细胞准备迁移到外周，上调表达识别鞘氨醇-1磷酸（S1P）的受体（S1PR1）的表达，S1P是血液中高浓度存在的脂质分子。 S1PR1 + T细胞沿着S1P梯度迁移并卷入血管循环中。
胸腺血管周围间隙（PVS）是实质和脉管系统之间的基膜分隔室。它们被认为促进了细胞的运输，特别是从胸腺移出的成熟T细胞（Mori等人，2007; ...
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| Isolation and Primary Culture of Various Cell Types from Whole Human Endometrial Biopsies
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Author:
Date:
2016-11-20
[Abstract] The isolation and primary culture of cells from human endometrial biopsies provides valuable experimental material for reproductive and gynaecological research. Whole endometrial biopsies are collected from consenting women and digested with collagenase and DNase I to dissociate cells from the extracellular matrix. Cell populations are then isolated through culturing, filtering and magnetic separation using cell-surface antigen markers. Here we provide a comprehensive protocol on how to isolate and culture individual cell types from whole endometrial tissues for use in in vitro experiments.
[摘要] 从人子宫内膜活组织检查中分离和原代培养细胞为生殖和妇科研究提供了有价值的实验材料。从同意的妇女收集完整的子宫内膜活检组织并用胶原酶和DNA酶I消化以从细胞外基质中分离细胞。然后通过使用细胞表面抗原标记物的培养，过滤和磁性分离来分离细胞群。在这里，我们提供了如何从整个子宫内膜组织分离和培养个体细胞类型以用于体外实验的全面方案。
[背景] 人子宫内膜是子宫内层最粘的层。其由柱状上皮和基础基质层组成，其经历循环再生，生长和响应于循环激素的转化。子宫内膜衬里分化为腺分泌表型为囊胚植入和成功怀孕提供了一个好客的环境。在没有怀孕这个层脱落，导致月经。从人子宫内膜活组织检查中分离和培养细胞允许在体外功能评估和与患者结果相关的细胞特征的研究。子宫内膜细胞的分离和培养是研究妇科和产科医学的许多方面的非常宝贵的研究模型，包括不孕，植入失败，复发性流产和月经紊乱。全人子宫内膜活检包含人子宫内膜基质细胞（HESCs），腔和子宫内膜上皮细胞（HEEC），红细胞和免疫细胞的混合群体。 ...
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| Reconstitution of Lymphopaenic Mice with Regulatory and Conventional T cell Subsets
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Author:
Date:
2016-05-20
[Abstract] Transfer of mature T cells into immunodeficient mice results in sub-optimal reconstitution of the peripheral T cell pool. Under lymphopenic conditions, dendritic cells are released from tonic control by regulatory T cells (Tregs), and consequently drive activation and proliferation of low affinity T cells specific for endogenous antigens. This oligoclonal proliferation results in a T cell population dominated by T cells possessing an effector/memory phenotype and a limited TCR repertoire. Oligoclonal expansion can be prevented by selectively reconstituting the Treg compartment prior to T cell transfer (Bolton et al., 2015). Reconstitution of the Treg compartment of lymphopenic mice has been tested in immunodeficient mouse strains such as Rag-1-/-or Rag-2-/- ...
[摘要] 将成熟T细胞转移到免疫缺陷小鼠中导致外周T细胞库的次优重建。在淋巴细胞减少症状下，树突状细胞通过调节性T细胞（Tregs）从强直对照释放，并因此驱动对内源性抗原特异的低亲和力T细胞的激活和增殖。这种寡克隆增殖导致由具有效应/记忆表型和有限TCR库的T细胞支配的T细胞群。可以通过在T细胞转移之前选择性重建Treg区室来防止寡克隆扩增（Bolton等人，2015）。已经在免疫缺陷小鼠品系例如Rag-1 /或 Rag-2 -/- 中测试了淋巴细胞减少小鼠的Treg区室的重建。 小鼠，以及在通过致死性全身照射作为调节骨髓移植（BMT）的瞬时淋巴细胞减少的免疫小鼠中。将纯化的Treg转移到这些宿主中，结合用外源IL-2处理7天，足以重建Treg区室并减少树突细胞共刺激分子的表达，这是防止自身反应性T细胞不适当扩增的关键过程。在Treg重建后转移的T细胞不经历快速的自发增殖，而是进行慢的内稳态分裂以用天然T细胞重新增殖T细胞库，从而允许外周T细胞库的最佳重建。
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