| In vitro Demonstration and Quantification of Neutrophil Extracellular Trap Formation
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Author:
Date:
2017-07-05
[Abstract] In the recent decade, neutrophil extracellular traps (NETs) have been identified and confirmed as a new anti-microbial weapon of neutrophils. In this protocol, we describe easy methods to demonstrate NET formation by immunofluorescence staining of extracellular chromatin fiber with anti-DNA/Histone H1 antibody and quantification of NETs by using a non-cell-permeable DNA specific dye Sytox orange.
[摘要] 近十年来，嗜中性粒细胞胞外捕获物（NETs）已被鉴定并确认为一种新的抗微生物中性粒细胞武器。 在该方案中，我们描述了通过使用抗DNA /组蛋白H1抗体的细胞外染色质纤维的免疫荧光染色和通过使用非细胞可渗透的DNA特异性染料Sytox orange来定量NETs的简便方法来证明NET形成。
【背景】嗜中性粒细胞构成循环白细胞中最大的进化保守部分。他们通过各种机制建立了针对病原体的第一道防线，包括形成嗜中性粒细胞胞外捕获物（NETs）。在此过程中，活化的嗜中性粒细胞从细胞核中排出染色质纤维。入侵的病原体然后被捕获在染色质网络内并被高度浓缩的NET缠结的抗微生物蛋白如髓过氧化物酶（MPO）和弹性蛋白酶（Brinkmann等人，2004）杀死。然而，NETs是一把双刃剑;来自过度活化的嗜中性粒细胞的无限制的NET形成也可能导致严重的组织损伤，例如通过NET的组蛋白组分的细胞毒性作用（Saffarzadeh等人，2012）。中性粒细胞过度活化并具有增强的形成NETs的能力的病理状况的一个例子是系统性红斑狼疮。狼疮患者血清中针对双链DNA及其它组分的抗体水平升高（Knight and Kaplan，2012; Yu and ...
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| Isolation, Culturing, and Differentiation of Primary Myoblasts from Skeletal Muscle of Adult Mice
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Author:
Date:
2017-05-05
[Abstract] Myogenesis is a multi-step process that leads to the formation of skeletal muscle during embryonic development and repair of injured myofibers. In this process, myoblasts are the main effector cell type which fuse with each other or to injured myofibers leading to the formation of new myofibers or regeneration of skeletal muscle in adults. Many steps of myogenesis can be recapitulated through in vitro differentiation of myoblasts into myotubes. Most laboratories use immortalized myogenic cells lines that also differentiate into myotubes. Although these cell lines have been found quite useful to delineating the regulatory mechanisms of myogenesis, they often show a great degree of variability depending on the origin of the cells and culture conditions. Primary myoblasts have been ...
[摘要] 造血是一种多步骤过程，导致在损伤的肌纤维的胚胎发育和修复期间骨骼肌的形成。在这个过程中，成肌细胞是主要的效应细胞类型，彼此融合或损伤肌纤维，导致新成肌纤维的形成或成年人骨骼肌的再生。通过体外成骨细胞分化成肌管可以概括出许多发生肌肉发育的步骤。大多数实验室使用也分化成肌管的永生化肌原细胞系。虽然已经发现这些细胞系对于描绘造血的调节机制非常有用，但是它们通常依赖于细胞的来源和培养条件而显示出很大的变异性。原代成肌细胞被认为是体外研究肌生成的最生理学相关模型。然而，由于成体骨骼肌的丰度低，原代成肌细胞的分离在技术上是有挑战性的。在本文中，我们描述了一种用于从小鼠的成年骨骼肌分离原代成肌细胞的改进方案。我们还描述了其培养和分化成肌管的方法。
背景 造血是一个复杂而高度协调的过程，其涉及多潜能中胚层细胞的测定，以产生成肌细胞，成肌细胞从细胞周期中排出，以及它们最终分化为骨骼肌纤维。 Myogen-5，MyoD，myogenin和MRF4的基因螺旋 - 环 - 螺旋转录因子的一组基因调控因子（MRFs）的顺序表达调控。 Myf-5和MyoD是成肌细胞形成，增殖和存活所需的主要MRFs，而其他MRF（如肌细胞生成素和MRF-4）在肌发生过程中起作用迟发，激活收缩蛋白和其他结构和代谢蛋白的基因表达（白金汉，2003; ...
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| Isolation of Mononuclear Cell Populations from Ovarian Carcinoma Ascites
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Author:
Date:
2017-04-05
[Abstract] Ovarian cancer is one of the most fatal tumors in women. Due to a lack of symptoms and adequate screening methods, patients are diagnosed at advanced stages with extensive tumor burden (Jelovac and Armstrong, 2011). Interestingly, ovarian cancer metastasis is generally found within the peritoneal cavity rather than other tissues (Lengyel, 2010; Tan et al., 2006). The reason behind this tissue tropism of the peritoneal cavity remains elusive. A prominent feature of this selectivity is ascites, the accumulation of fluid within the peritoneal cavity, containing, amongst others, immune cells, tumor cells and various soluble factors that can be involved in the progression of ovarian cancer (Kipps et al., 2013). The protocol described here is used to isolate mononuclear cells ...
[摘要] 卵巢癌是女性最致命的肿瘤之一。由于缺乏症状和适当的筛查方法，患者被诊断为具有广泛肿瘤负担的晚期阶段（Jelovac和Armstrong，2011）。有趣的是，卵巢癌转移通常发生在腹腔内，而不是其他组织（Lengyel，2010; Tan等人，2006）。腹膜腔组织向性背后的原因仍然难以捉摸。这种选择性的一个突出特征是腹水，腹膜内的液体积累，其中包含免疫细胞，肿瘤细胞和可参与卵巢癌进展的各种可溶性因子（Kipps等，。，2013）。这里描述的方案用于从腹水中分离单核细胞以研究腹膜腔内免疫系统的功能。
使用Lymphoprep 的梯度离心是分离外周血单核细胞（PBMC）的标准方案。我们稍微调整了方案，关于样品制备和洗涤步骤的数量，以便从腹水中分离单核细胞。
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