Isolation and Cultivation of Primary Brain Endothelial Cells from Adult Mice
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Author:
Date:
2017-05-20
[Abstract] Brain endothelial cells are the major building block of the blood-brain barrier. To study the role of brain endothelial cells in vitro, the isolation of primary cells is of critical value. Here, we describe a protocol in which vessel fragments are isolated from adult mice. After density centrifugation and mild digestion of the fragments, outgrowing endothelial cells are selected by puromycin treatment and grown to confluence within one week.
[摘要] 脑内皮细胞是血脑屏障的主要组成部分。 为了研究脑内皮细胞在体外的作用,原代细胞的分离是临床价值。 在这里,我们描述了一种方案,其中血管片段与成年小鼠分离。 在密度离心和片段的温和消化后,通过嘌呤霉素处理选择出生长的内皮细胞,并在一周内生长至汇合。 【背景】血脑屏障保护大脑免受细胞和物质的不受控制的侵入。 这主要是由脑内皮细胞形成的屏障组成的紧密和粘附连接限制细胞旁运输。 该方案被开发以克服维持其关键特征的小鼠脑内皮细胞系的有限可用性,例如表达足够量的紧密连接蛋白如闭合蛋白,ZO-1或紧密连接蛋白-5以诱导高跨内皮细胞抗性。 此外,从内含基因修饰的小鼠中分离脑内皮细胞可以在体外研究基因特异性功能。 使用这种方法,我们以前补充了体内研究,证明NF-κB信号在脑内皮细胞中维持正常血脑屏障功能的重要性(Ridder等,2015)。
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House Dust Mite Extract and Cytokine Instillation of Mouse Airways and Subsequent Cellular Analysis
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Author:
Date:
2016-07-20
[Abstract] Asthma is a complex disease of the airways primarily mediated by T helper 2 cells and innate lymphoid type 2 cells (Licona et al.,2013). Mice do not develop spontaneous asthma and therefore models have been developed for the assessment of key processes that underlie human pathology (Nial et al.,2008). Exposure to House Dust Mite (HDM) extract induces many key features of acute airway inflammation including elevated IgE levels, eosinophilia, goblet cell metaplasia, epithelial hypertrophy and airway hyperresponsiveness (AHR) in response to methacholine (Hammad et al., 2009; Dullaers et al., 2012; Coquet et al., 2015). The exact dose and duration of exposure to HDM can affect the type and extent of inflammation. In our case, we start with a low ...
[摘要] 哮喘是主要由T辅助细胞2和先天淋巴2型细胞介导的气道的复杂疾病(Licona等人,2013)。小鼠不发展自发性哮喘,因此已经开发了用于评估作为人类病理学基础的关键过程的模型(Nial等人,2008)。暴露于房尘螨(HDM)提取物诱导急性气道炎症的许多关键特征,包括升高的IgE水平,嗜酸性粒细胞增多,杯状细胞化生,上皮肥大和响应乙酰甲胆碱的气道高反应性(AHR)(Hammad等人, ,2009; Dullaers等人,2012; Coquet等人,2015)。暴露于HDM的确切剂量和持续时间可以影响炎症的类型和程度。在我们的情况下,我们从在攻击时增加的低致敏剂量开始,而其他的在小鼠致敏期间使用不同的方案或更高的抗原浓度(Hondowicz等人,2016; Trompette < et="" al="" 。,2014; ="" zaiss="" et="" al="" 。,2015)。我们认为使用低敏感剂量更准确地分离初级和次级免疫应答,并降低致敏过程中给予的hdm继续刺激攻击期间的免疫应答的可能性(coquet等人,2015;="" plantinga="" et="" al="" 。,2013)。在这里,我们在文本,图片和视频中概述了如何通过鼻内途径施用hdm提取物或细胞因子,并简要地谈谈随后在气道中的炎症的分析[在han&="">
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