| In vivo Analysis of Cyclic di-GMP Cyclase and Phosphodiesterase Activity in Escherichia coli Using a Vc2 Riboswitch-based Assay
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Author:
Date:
2018-03-05
[Abstract] Cyclic di-guanosine monophosphate (c-di-GMP) is a ubiquitous second messenger that regulates distinct aspects of bacterial physiology. It is synthesized by diguanylate cyclases (DGCs) and hydrolyzed by phosphodiesterases (PDEs). To date, the activities of DGC and PDE are commonly assessed by phenotypic assays, mass spectrometry analysis of intracellular c-di-GMP concentration, or riboswitch-based fluorescent biosensors. However, some of these methods require cutting-edge equipment, which might not be available in every laboratory. Here, we report a new simple, convenient and cost-effective system to assess the function of DGCs and PDEs in E. coli. This system utilizes the high specificity of a riboswitch to c-di-GMP and its ability to regulate the expression of a downstream ...
[摘要] 环状二磷酸鸟苷（c-di-GMP）是一种无处不在的第二信使，它调节细菌生理学的不同方面。 它由diguanylate环化酶（DGC）合成并被磷酸二酯酶（PDE）水解。 迄今为止，通常通过表型分析，细胞内c-di-GMP浓度的质谱分析或基于核糖开关的荧光生物传感器来评估DGC和PDE的活性。 但是，其中一些方法需要尖端设备，而这些设备可能不适用于每个实验室。 在这里，我们报告了一个新的简单，方便和具有成本效益的系统，用于评估E中DGC和PDE的功能。大肠杆菌。 该系统利用核糖开关对c-di-GMP的高特异性及其响应于c-di-GMP浓度而调节下游β-半乳糖苷酶报道基因的表达的能力。 在该协议中，我们描述了该系统的构建及其用于评估DGC和PDE酶的活性。
【背景】Cyclic-di-GMP是细菌中重要且无处不在的第二信使，其调节各种过程，例如运动到衰退转变，生物膜形成，毒力和细胞周期进展（Römling等人， ，2013）。 GG（D / ...
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| House Dust Mite Extract and Cytokine Instillation of Mouse Airways and Subsequent Cellular Analysis
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Author:
Date:
2016-07-20
[Abstract] Asthma is a complex disease of the airways primarily mediated by T helper 2 cells and innate lymphoid type 2 cells (Licona et al.,2013). Mice do not develop spontaneous asthma and therefore models have been developed for the assessment of key processes that underlie human pathology (Nial et al.,2008). Exposure to House Dust Mite (HDM) extract induces many key features of acute airway inflammation including elevated IgE levels, eosinophilia, goblet cell metaplasia, epithelial hypertrophy and airway hyperresponsiveness (AHR) in response to methacholine (Hammad et al., 2009; Dullaers et al., 2012; Coquet et al., 2015). The exact dose and duration of exposure to HDM can affect the type and extent of inflammation. In our case, we start with a low ...
[摘要] 哮喘是主要由T辅助细胞2和先天淋巴2型细胞介导的气道的复杂疾病（Licona等人，2013）。小鼠不发展自发性哮喘，因此已经开发了用于评估作为人类病理学基础的关键过程的模型（Nial等人，2008）。暴露于房尘螨（HDM）提取物诱导急性气道炎症的许多关键特征，包括升高的IgE水平，嗜酸性粒细胞增多，杯状细胞化生，上皮肥大和响应乙酰甲胆碱的气道高反应性（AHR）（Hammad等人， ，2009; Dullaers等人，2012; Coquet等人，2015）。暴露于HDM的确切剂量和持续时间可以影响炎症的类型和程度。在我们的情况下，我们从在攻击时增加的低致敏剂量开始，而其他的在小鼠致敏期间使用不同的方案或更高的抗原浓度（Hondowicz等人，2016; Trompette < et="" al="" 。，2014; ="" zaiss="" et="" al="" 。，2015）。我们认为使用低敏感剂量更准确地分离初级和次级免疫应答，并降低致敏过程中给予的hdm继续刺激攻击期间的免疫应答的可能性（coquet等人，2015;="" plantinga="" et="" al="" 。，2013）。在这里，我们在文本，图片和视频中概述了如何通过鼻内途径施用hdm提取物或细胞因子，并简要地谈谈随后在气道中的炎症的分析[在han&="">
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