| Real-time Fluorescence Measurement of Enterovirus Uncoating
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Author:
Date:
2020-04-05
[Abstract] Viruses need to open, i.e., uncoat, in order to release their genomes for efficient replication and translation. Especially for non-enveloped viruses, such as enteroviruses, the cues leading to uncoating are less well known. The status of the virus has previously been observed mainly by transmission electron microscopy using negative staining, cryo electron microscopy, X-ray crystallography or gradient separation (reviewed in Tuthill et al., 2010, Myllynen et al., 2016, Ruokolainen et al., 2019). However, monitoring of uncoating has been limited by the lack of methods detecting dynamic changes of the virions. Here, we present a real-time fluorescence based protocol, which detects the viral genome (RNA) during various stages of uncoating in vitro, ...
[摘要]
[摘要 ] 病毒需要打开，即，脱壳，以释放其基因组的有效复制和翻译。特别是对于诸如肠病毒之类的非包膜病毒，导致脱壳的线索鲜为人知。病毒的状态之前已经使用负染色主要见于通过透射电子显微镜，低温电子显微镜，X射线晶体学或梯度分离（在塔海尔综述等人。，2010，Myllynen 等人，2016年，Ruokolainen 等。，2019）。但是，监控您 由于缺乏检测病毒粒子动态变化的方法，涂层受到了限制。在这里，我们提出了一种实时基于荧光的协议，其中在脱壳的不同阶段检测到病毒基因组（RNA）在体外，而RNA仍然是颗粒内部的是已经实际RNA释放之前被扩展，并且当所述RNA具有从病毒颗粒中完全释放出来。我们的方法允许探索各种分子因素如何促进或抑制病毒的脱壳。
[背景 ] 在我们先前的研究中，我们发现感染性中间回声病毒1颗粒使RNA嵌入染料SYBR Green II进入病毒颗粒（Myllynen 等，2016）。可以观察到这是荧光的增加，并且记录的荧光不易被RNase消化（Myllynen 等，2016）。利用此信息，我们开发了一种实时方法，用于在荧光光谱中使用SYBR Green II染料和RNase监视病毒的打开。通过添加SYBR Green II和引发脱膜的因素，并观察SYBR Green ...
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| Quantification of Neisseria meningitidis Adherence to Human Epithelial Cells by Colony Counting
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Author:
Date:
2018-02-05
[Abstract] To cause an infection, the human specific pathogen Neisseria meningitides must first colonize the nasopharynx. Upon tight interaction with the mucosal epithelium, N. meningitidis may cross the epithelial cellular barrier, reach the bloodstream and cause sepsis and/or meningitis. Since N. meningitidis niche is restricted to humans the availability of relevant animal models to study host-pathogen interactions are limiting. Therefore, most findings that involve N. meningitidis colonization derive from studies using cultured human cell lines. Human epithelial cells have been successfully used to examine and identify molecular effectors involved in initial adherence of the pathogen. Here, we describe a standard protocol to quantify the adherence of N. ...
[摘要] 为了引起感染，人类特定的病原体脑膜炎奈瑟氏脑必须首先在鼻咽中定居。 与粘膜上皮紧密相互作用时， 脑膜炎双球菌可能穿过上皮细胞屏障，到达血流并引起败血症和/或脑膜炎。 由于 N meningitidis niche限于人类。 因此，大多数涉及N 脑膜炎菌群定植来源于使用培养的人类细胞系的研究。 在最初的病原体坚持。 在这里，我们描述了一个标准协议来量化N的遵守情况。 脑膜炎双球菌对上皮细胞FaDu细胞的作用。 感染后收集的细胞裂解物的集落计数用于量化对上皮细胞的粘附。
【背景】作为细菌发病机制的重要一步。细菌粘附素与宿主细胞表面受体之间的分子相互作用决定了定植位点（Soto and Hultgren，1999）。鼻咽中的上皮层形成人类限制性病原体N的第一个细胞屏障。 meningitidis 遇到和无症状殖民。牢固粘附，并与宿主细胞相互作用可导致上皮细胞和进入血液的渗透，在危及生命的败血症和/或脑膜炎（斯蒂芬斯，2009）得到的。从细菌膜延伸出来的长细丝（称为IV型菌毛（Tfp））与PilC1尖端定位的粘附素在初始依从性中起关键作用。脑膜炎到鼻咽上皮细胞（Marceau等，1995; Rudel等，1995）。 Tfp不仅促进与宿主细胞的相互作用，而且参与细菌聚集体的发育，这可以有助于高水平的粘附和抵抗剪切应力（Helaine等，2005，Mikaty ...
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| Reporter Assay for Semen-mediated Enhancement of HIV-1 Infection
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Author:
Date:
2016-07-20
[Abstract] Semen contains amyloid fibrils that enhance HIV-1 infection (Münch et al., 2007; Kim et al., 2010; Roan et al., 2011; Arnold et al., 2012; Usmani et al., 2014; Roan et al., 2014). Positively charged semen amyloids capture negatively charged viral particles and increase their attachment rates to the cell surface resulting in enhanced fusion and infection (Roan et al., 2009). Since semen is highly cytotoxic, we developed an assay that allows quantification of the infection enhancing activity of semen while minimizing its cell damaging activity. Here, we describe two protocols that allow the quantification of the infectivity enhancing activity of semen using a reporter cell line (TZM-bl cells) or peripheral blood mononuclear ...
[摘要] 精液含有增强HIV-1感染的淀粉样蛋白原纤维（Münch等，2007; Kim等，2010; Roan等，2011; Arnold等，2012; Usmani等，2014; Roan et al。 ，2014）。 带正电的精液淀粉样蛋白捕获带负电的病毒颗粒并增加其对细胞表面的附着率，导致增强的融合和感染（Roan等人，2009）。 由于精液具有高度的细胞毒性，我们开发了一种能够定量精液感染增强活性同时最大限度降低其细胞损伤活性的测定方法。 在这里，我们描述允许使用报道细胞系（TZM-bl细胞）或外周血单核细胞（PBMC）定量精液的感染性增强活性的两种方案。
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