{{'Search' | translate}}
 

1 ml needless syringe

1mL BD TM滑动尖端一次性结核菌素注射器

Company: BD
Catalog#: 309659
Bio-protocol()
Company-protocol()
Other protocol()

A High-throughput Assay for mRNA Silencing in Primary Cortical Neurons in vitro with Oligonucleotide Therapeutics
Author:
Date:
2017-08-20
[Abstract]  Primary neurons represent an ideal cellular system for the identification of therapeutic oligonucleotides for the treatment of neurodegenerative diseases. However, due to the sensitive nature of primary cells, the transfection of small interfering RNAs (siRNA) using classical methods is laborious and often shows low efficiency. Recent progress in oligonucleotide chemistry has enabled the development of stabilized and hydrophobically modified small interfering RNAs (hsiRNAs). This new class of oligonucleotide therapeutics shows extremely efficient self-delivery properties and supports potent and durable effects in vitro and in vivo. We have developed a high-throughput in vitro assay to identify and test hsiRNAs in primary neuronal cultures. To simply, rapidly, ... [摘要]  原代神经元是鉴定用于治疗神经变性疾病的治疗性寡核苷酸的理想细胞系统。然而,由于原代细胞的敏感性,使用经典方法转染小干扰RNA(siRNA)是费力的,并且通常显示低效率。寡核苷酸化学的最新进展使得稳定和疏水修饰的小干扰RNA(hsiRNA)的发展成为可能。这种新型的寡核苷酸治疗剂显示出非常有效的自我传递性质,并且在体外和体内支持有效和持久的效果。我们开发了高通量的体外测定法来鉴定和测试原代神经元培养物中的hsiRNA。为了简单,快速,准确地量化数百个hsiRNA的mRNA沉默,我们使用QuantiGene 2.0定量基因表达测定法。这种高通量,96孔板测定法可以直接从样品裂解液中定量mRNA水平。在这里,我们描述了一种制备96孔板格式的小鼠原代皮质神经元的短期培养物用于寡核苷酸治疗剂的高通量测试的方法。该方法支持在短短两周内测试hsiRNA文库和鉴定潜在的治疗方法。我们详细介绍了从初级神经元准备到数据分析的高通量测定工作流程的方法。该方法可以帮助鉴定用于治疗各种神经疾病的寡核苷酸治疗剂。
【背景】寡核苷酸治疗剂代表了通过沉默突变蛋白的表达,可以靶向任何遗传定义的病症的新一类药物。具体地,siRNA是负载于RNA诱导的沉默复合体(RISC)中的双链寡核苷酸,并且可以在mRNA翻译之前使mRNA沉默。然而,未修饰的siRNA是不稳定的,并且不能在没有阳离子脂质制剂的帮助下进入细胞,其可能对原代细胞如神经元有毒性。在本协议中,我们使用自我递送,疏水修饰的siRNA(hsiRNA)进行mRNA沉默。最近在寡核苷酸化学方面的进展使得这些稳定的hsiRNA的设计促进了细胞内化,有效进入RISC以及有力击倒靶基因(Byrne等,2013; ...

Glioma Induction by Intracerebral Retrovirus Injection
Author:
Date:
2017-07-20
[Abstract]  Glioblastoma (GBM) is the most common primary brain cancer in adults and has a poor prognosis. It is characterized by a high degree of cellular infiltration that leads to tumor recurrence, atypical hyperplasia, necrosis, and angiogenesis. Despite aggressive treatment modalities, current therapies are ineffective for GBM. Mouse GBM models not only provide a better understanding in the mechanisms of gliomagenesis, but also facilitate the drug discovery for treating this deadly cancer. A retroviral vector system that expresses PDGFBB (Platelet-derived growth factor BB) and inactivates PTEN (Phosphatase and tensin homolog) and P53 tumor suppressors provides a rapid and efficient induction of glioma in mice with full penetrance. In this protocol, we describe a simple and practical method for ... [摘要]  成胶质细胞瘤(GBM)是成人中最常见的原发性脑癌,预后差。其特征在于高度的细胞浸润,导致肿瘤复发,非典型增生,坏死和血管生成。尽管采取积极的治疗方式,目前的疗法对GBM无效。小鼠GBM模型不仅提供了对胶质瘤发生机制的更好理解,而且有助于药物发现治疗这种致命的癌症。表达PDGFBB(血小板衍生生长因子BB)和灭活PTEN(磷酸酶和张力蛋白同源物)和P53肿瘤抑制因子的逆转录病毒载体系统提供了具有全面外显子的小鼠中胶质瘤的快速和有效的诱导。在该方案中,我们描述了一种简单实用的方法,用于在鼠脑中通过逆转录病毒注射诱导GBM形成。该系统对神经胶质瘤的诱导进行空间和时间控制,并允许用生物发光报告物评估治疗效果。
【背景】胶质母细胞瘤(GBM)是最具侵袭性的恶性脑肿瘤,不幸的是几乎总是致命的。尽管多种治疗方式有进展,但是尚未开发出治疗GBM的有效治疗方法。这种疾病的机制仍然知之甚少。动物模型一直是定义GBM发病机制和基因或药物治疗试验的非常重要的工具。已经开发了几种小鼠模型,其目的是产生尽可能接近模拟人类疾病的疾病,并表现出类似的分子,遗传和组织学特征。突出使用的模型是异种移植(Hingtgen等人,2008)模型,其中人类肿瘤细胞系可以在脑中原位移植以及在免疫受损的小鼠的皮下区域异位移植,提供了具有大肿瘤块在短时间内。遗传工程小鼠模型(GEMM)具有特异性增益的致癌活性或丧失肿瘤抑制通路,其类似于GBM中最频繁失调的通路中的扰动,导致啮齿类动物形成胶质瘤。 ...

Loading of Extracellular Vesicles with Chemically Stabilized Hydrophobic siRNAs for the Treatment of Disease in the Central Nervous System
Author:
Date:
2017-06-20
[Abstract]  Efficient delivery of oligonucleotide therapeutics, i.e., siRNAs, to the central nervous system represents a significant barrier to their clinical advancement for the treatment of neurological disorders. Small, endogenous extracellular vesicles were shown to be able to transport lipids, proteins and RNA between cells, including neurons. This natural trafficking ability gives extracellular vesicles the potential to be used as delivery vehicles for oligonucleotides, i.e., siRNAs. However, robust and scalable methods for loading of extracellular vesicles with oligonucleotide cargo are lacking. We describe a detailed protocol for the loading of hydrophobically modified siRNAs into extracellular vesicles upon simple co-incubation. We detail methods of the workflow from ... [摘要]  将寡核苷酸治疗剂即siRNAs有效递送到中枢神经系统代表了治疗神经系统疾病的临床进展的显着障碍。 小的内源性细胞外囊泡显示能够在细胞(包括神经元)之间传输脂质,蛋白质和RNA。 这种天然的贩运能力使细胞外囊泡成为寡核苷酸即siRNA的递送载体的潜力。 然而,缺乏用寡核苷酸载体装载细胞外囊泡的稳健和可扩展的方法。 我们描述了在简单共孵育后将疏水修饰的siRNA加载到细胞外囊泡中的详细方案。 我们详细介绍了从细胞外囊泡纯化到数据分析的工作流程。 该方法可以促进基于细胞外基于囊泡的疗法用于治疗广泛的神经障碍。
【背景】siRNA是一种类型的寡核苷酸治疗剂,一类新的直接靶向信使RNA(mRNA)的药物,以防止导致疾病表型的蛋白质的表达。 siRNA的治疗应用是非常有希望的,因为siRNA可以被设计为靶向任何基因,包括不能用小分子或基于蛋白质的疗法“可药用”的基因。在寡核苷酸治疗剂的化学中取得的进展使得能够设计完全稳定的疏水改性的siRNA(hsiRNA,用2'-O-甲基或2'-氟以及硫代磷酸酯和共价键合到胆固醇的有义链修饰),其促进细胞hsiRNA的自我内化,并保持有效负载在RNA诱导的沉默复合体(RISC)中的能力(Byrne等,2013; Khvorova和Watts,2017)。与乘客链的3'末端连接的胆固醇缀合物对于快速细胞膜缔合是必需的(Byrne等,2013; ...

Comments