| Enzymatic Assays and Enzyme Histochemistry of Tuta absoluta Feeding on Tomato Leaves
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Author:
Date:
2018-09-05
[Abstract] Enzymes play a key role in insect-plant relationships. For a better understanding of these interactions, we analyzed Tuta absoluta digestive enzymes. Here, we describe a detailed protocol for the detection of trypsin and papain-like enzymes in Tuta absoluta larvae by enzyme histochemistry. This assay uses frozen and unfixed samples to avoid the loss of enzymatic activity. We also describe a protocol for the quantification of trypsin and papain-like enzymes in the larvae of Tuta absoluta at different developmental instars.
[摘要] 酶在昆虫植物关系中起着关键作用。 为了更好地理解这些相互作用，我们分析了 Tuta absoluta 消化酶。 在这里，我们描述了通过酶组织化学检测 Tuta absoluta 幼虫中的胰蛋白酶和木瓜蛋白酶样酶的详细方案。 该测定使用冷冻和未固定的样品以避免酶活性的丧失。 我们还描述了在不同发育期的 Tuta absoluta 幼虫中量化胰蛋白酶和木瓜蛋白酶样酶的方案。
【背景】植物和昆虫共存了数百万年，并进化出一系列相互作用，影响不同水平的生物。昆虫设法发展不同的生理和形态适应，以克服植物防御机制。因此，更好地了解其重要功能将有助于其有针对性的控制。昆虫的不同生理功能依赖于酶：消化，呼吸，循环，肌肉，神经，生殖和内分泌。几种酶参与消化。蛋白酶如胰蛋白酶，胰凝乳蛋白酶，胃蛋白酶或羧肽酶是蛋白质消化的原因，蛋白质消化是昆虫的氨基酸来源。因此，消化蛋白酶抑制剂已被成功用于提高植物对昆虫的抗性（Smigocki et al。，2013; Quilis et al。，2014; Hamza et al ...
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| Infection of Soybean Plants with the Insect Bacterial Symbiont Burkholderia gladioli and Evaluation of Plant Fitness
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2017-12-20
[Abstract] To investigate the establishment and consequences of host-microbe interactions, it is important to develop controlled infection assays suitable for each system, as well as appropriate methods to evaluate successful infection and its associated effects. Here, we describe a procedure for bacterial inoculation of soybean plants, followed by the assessment of systemic infection and impact on plant fitness. Soybean (Glycine max) seedlings were mechanically wounded using a device that mimics insect herbivory and inoculated with known cell numbers of Burkholderia gladioli bacteria previously isolated from an insect host. The impact on the plants was evaluated by monitoring changes in height, time to flowering and chlorophyll content during plant development, and by quantifying ...
[摘要] 为了研究宿主 - 微生物相互作用的建立和后果，开发适用于每个系统的受控感染测定法以及评估成功感染及其相关作用的适当方法是重要的。在这里，我们描述了大豆植物的细菌接种程序，然后评估全身感染和对植物健康的影响。使用模拟昆虫食草动物的装置对大豆（Glycine max）幼苗进行机械性伤害，并用先前从昆虫宿主分离的已知细胞数目的伯克霍尔德氏菌（B.coli）进行接种。通过监测植物发育过程中身高，开花时间和叶绿素含量的变化以及通过与用无菌水接种的植物相比量化种子产量来评估对植物的影响。使用定量PCR和荧光原位杂交（FISH）在来自发育植物的组织中检查细菌感染的存在和增殖。
微生物与不同的真核生物建立共生关系，对宿主的适应性有着深远的影响，从有益到不利（Frank，1997）。在许多情况下，这些协会是直接或间接的影响与其他生物，如潜在的替代主机相互作用。举例来说，植物，微生物和昆虫之间有许多三方相互作用，其中微生物共生体在不同宿主之间传播并影响相关生物体的生理或生态（Frago等人）。 ，2012; Gilbert et al。，2012）。在植物性的Lagriinae甲虫中，与来自植物致病性分支的细菌（Burkholderia gladioli）建立了共生伙伴关系，表明这种关联在三方相互作用的情况下发展。先前已经证明了从 Lagria villosa ...
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| Aorta Atherosclerosis Lesion Analysis in Hyperlipidemic Mice
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2016-06-05
[Abstract] Atherosclerosis is a chronic inflammatory disease of large and medium-sized arteries. Apolipoprotein E-deficient (ApoE-/-) mice are used as experimental models to study human atherosclerosis. ApoE-/- mice are constitutively hyperlipidemic and develop intima plaques that resemble human plaques. Various issues including experimental design for lesion analysis, dietary conditions, isolation of the aorta, staining methods, morphometry, group size, age, the location within the arterial tree, and statistical analyses are important parameters that need to be addressed to obtain robust data. Here, we provide detailed methods to quantify aorta atherosclerosis.
[摘要] 动脉粥样硬化是大和中等大小动脉的慢性炎性疾病。 载脂蛋白E缺陷（ApoE -/-/- ）小鼠用作实验模型来研究人动脉粥样硬化。 ApoE -/-/- 小鼠是组成性高脂血症并且发展类似于人噬斑的内膜斑块。 包括病变分析的实验设计，饮食条件，主动脉分离，染色方法，形态测定，组大小，年龄，动脉树内的位置和统计分析的各种问题是需要解决以获得鲁棒数据的重要参数。 在这里，我们提供详细的方法来量化主动脉粥样硬化。
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