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SuperScriptTM III First-Strand Synthesis System

SuperScript ® III第一链合成系统

Company: Thermo Fisher Scientific
Catalog#: 18080051
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Other protocol()

Myeloid Progenitor Transformation Assay
Author:
Date:
2017-12-05
[Abstract]  Numerous oncogenes have been identified to cause leukemia. For example, chromosomal translocation generates various fusion genes of the mixed-lineage leukemia (MLL) gene and a partner gene in leukemia, whose gene products transform primary myeloid progenitors into an immortalized state. To characterize the transforming ability of leukemic oncogenes, researchers in the field have developed an ex vivo murine myeloid transformation assay using retroviral gene transduction and its protocol has been improved over the past 10 years. Here, we provide the detailed procedure for this assay. [摘要]  许多致癌基因已被确定为导致白血病。 例如,染色体易位在白血病中产生混合谱系白血病(MLL )基因和伴侣基因的各种融合基因,其基因产物将原始骨髓祖细胞转化为永生状态。 为了表征白血病癌基因的转化能力,本领域的研究人员已经利用逆转录病毒基因转导开发了一种离体小鼠骨髓转化试验,其方案在过去的10年中得到了改进。 在这里,我们提供了这个检测的详细程序。

【背景】染色体易位产生多种导致白血病的MLL融合基因(Meyer等人,2017)。野生型混合谱系白血病(MLL)蛋白质起着转录调节剂的作用,其在造血不成熟祖细胞中增强包括同源框(homoxox(Hox))基因在内的一组基因的表达(Jude等。,2007)。在正常造血期间,Hox基因在干/祖细胞部分中表达,但在分化过程中转录下调(Somervaille和Cleary,2006; Yokoyama等人, 2013年);然而,MLL融合蛋白组成性地上调其靶基因并阻断分化以在离体培养条件下建立永生状态。最近,我们报道了MLL-ENL和MLL-AF10融合蛋白招募AF4以激活转录并且还募集DOT1L复合物以维持相同靶基因的转录以有效地转化造血祖细胞(Okuda等人, ...

Single Genome Sequencing of Expressed and Proviral HIV-1 Envelope Glycoprotein 120 (gp120) and nef Genes
Author:
Date:
2017-06-20
[Abstract]  The current study provides detailed protocols utilized to amplify the complete HIV-1 gp120 and nef genes from single copies of expressed or integrated HIV present in fresh-frozen autopsy tissues of patients who died while on combined antiretroviral therapy (cART) with no detectable plasma viral load (pVL) at death (Lamers et al., 2016a and 2016b; Rose et al., 2016). This method optimizes protocols from previous publications (Palmer et al., 2005; Norström et al., 2012; Lamers et al., 2015; 2016a and 2016b; Rife et al., 2016) to produce single distinct PCR products that can be directly sequenced and includes several cost-saving and time-efficient modifications. [摘要]  目前的研究提供了详细的方案,用于扩增完整的HIV-1 gp120和nef基因,从单个拷贝的表达或综合的HIV存在于新鲜冷冻尸检组织中,在联合抗逆转录病毒治疗(cART)而死亡的患者中,没有可检测的血浆病毒 死亡时负荷(pVL)(Lamers等,2016a和2016b; Rose等,2016)。 该方法优化了以前的出版物(Palmer等,2005;Norström等,2012; Lamers等,2015; 2016a和2016b; Rife等,2016)的方案,以产生可以直接的单独不同的PCR产物 测序并包括若干成本节约和时间有效的修改。
【背景】三十多年前,艾滋病毒感染及其临床表现,即获得性免疫缺陷综合征(AIDS),已成为全球流行病。此后,对艾滋病病毒发病机制的认识已经出现,药物治疗的发展显着延长了患者的生命。目前的cART方案包括以几种方式抑制病毒复制的各种药物,其允许几乎完全抑制血液中发现的病毒颗粒和恢复健康的CD4 + T细胞群体(CD4 +)(Autran等人,1997 )。然而,cART治疗患者血浆中持续存在非常低水平的艾滋病毒,即使是经过数十年治疗的患者,也表明存在一种以病毒为基础的细胞库。病毒储库包含不释放感染性病毒(即被潜在感染)的感染细胞,但可以在活化后进行,这可能在各种条件下发生(Chun等,1995和1997)。 ...

Quantitative Measurements of HIV-1 and Dextran Capture by Human Monocyte-derived Dendritic Cells (MDDCs)
Author:
Date:
2016-11-20
[Abstract]  The aim of this protocol is to describe how to measure and quantify the amount of HIV-1 particles and dextran molecules internalized in human monocyte derived dendritic cells (MDDCs), using three different techniques: flow cytometry, quantitative PCR and confocal microscopy. [摘要]  本协议的目的是描述如何使用三种不同的技术:流式细胞术,定量PCR和共聚焦显微镜来测量和量化人类单核细胞衍生树突细胞(MDDCs)中内在的HIV-1颗粒和葡聚糖分子的量。

[背景] 开发此协议是为了评估在人单核细胞衍生的树突细胞中肌动蛋白成核破坏时HIV-1内化的变化。在shRNA筛选后,识别对于HIV-1从树突状细胞转移到T细胞重要的基因,我们观察到肌动蛋白成核的中断导致从富含肌动蛋白的树突到水泡的转变,由于过量的肌动球蛋白收缩。结果,观察到HIV-1转移的减少和由于水泡收缩驱动的巨噬细胞增多引起的HIV-1内化的增加。我们的结论是,肌动蛋白成核和稳定的效应器是维持艾滋病毒1对肌动蛋白丰富的树突和限制其内吞作用,有效转移到T淋巴细胞的关键(Menager和Littman,2016)。

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