| Differentiation of Myeloid-derived Suppressor Cells from Murine Bone Marrow and Their Co-culture with Splenic Dendritic Cells
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Author:
Date:
2017-09-20
[Abstract] Myeloid-derived suppressor cells (MDSCs) possess the ability to suppress the immune response, and to amplify the regulatory properties of other immune cells, i.e., dendritic cells. Here we describe a protocol in which MDSCs were differentiated from murine bone marrow cells, and CD11c+ dendritic cells were purified from murine spleens. MDSCs and CD11c dendritic cells can be co-cultured and the immunoregulatory phenotype of the MDSCs-conditioned dendritic cells could be assessed by means of a specific functional in vivo experiment, i.e., a skin test as a measure of the delayed-type hypersensitivity reaction toward a poorly immunogenic antigen.
[摘要] 骨髓来源的抑制细胞（MDSCs）具有抑制免疫应答的能力，并扩增其他免疫细胞即树突状细胞的调节特性。 在这里，我们描述了MDSC与鼠骨髓细胞分化的方案，并且从鼠脾中纯化CD11c +树突状细胞。 可以共培养MDSC和CD11c树突状细胞，并且可以通过特定的功能体内实验来评估MDSCs条件树突细胞的免疫调节表型，即皮肤试验作为延迟型超敏反应的量度 抗免疫原性较差的抗原。
【背景】骨髓来源的抑制细胞（MDSCs）是由早期分化阶段的巨噬细胞，粒细胞，树突状细胞和骨髓细胞的前体组成的骨髓细胞组（Youn等人，2008），其在肿瘤的淋巴组织中大量积累感染性小鼠以及感染性疾病，败血症和创伤的小鼠。这些细胞的主要特征是它们以Ag特异性和/或非特异性方式抑制T细胞应答的能力。这些细胞现在被认为是负责肿瘤相关免疫缺陷的主要细胞类型之一;涉及MDSC介导的免疫抑制的主要因素包括Arg1的高表达（Marvel和Gabrilovich，2015）。精氨酸酶1（Arg1）和吲哚胺2,3-双加氧酶1（IDO1）分别是催化L-精氨酸（L-Arg）和L-色氨酸（L-Trp）降解的免疫调节酶，导致局部氨基酸剥夺。此外，与Arg1不同，IDO1在树突细胞（DC）中也具有非酶信号传导活性（Mondanelli等，2017）。除了其固有的免疫抑制活性外，MDSC还可能扩增其他免疫细胞的调节特性，特别是在肿瘤微环境中。虽然建立了MDSC-巨噬细胞相互作用的一些机制（Ugel等，2015），MDSCs和DCs之间的串扰仍然不清楚（Ostrand-Rosenberg等，2012）;为弥补这一差距，我们已经制定了该方案，并且我们证明了Arg1 ...
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| Isolation and Primary Culture of Various Cell Types from Whole Human Endometrial Biopsies
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Author:
Date:
2016-11-20
[Abstract] The isolation and primary culture of cells from human endometrial biopsies provides valuable experimental material for reproductive and gynaecological research. Whole endometrial biopsies are collected from consenting women and digested with collagenase and DNase I to dissociate cells from the extracellular matrix. Cell populations are then isolated through culturing, filtering and magnetic separation using cell-surface antigen markers. Here we provide a comprehensive protocol on how to isolate and culture individual cell types from whole endometrial tissues for use in in vitro experiments.
[摘要] 从人子宫内膜活组织检查中分离和原代培养细胞为生殖和妇科研究提供了有价值的实验材料。从同意的妇女收集完整的子宫内膜活检组织并用胶原酶和DNA酶I消化以从细胞外基质中分离细胞。然后通过使用细胞表面抗原标记物的培养，过滤和磁性分离来分离细胞群。在这里，我们提供了如何从整个子宫内膜组织分离和培养个体细胞类型以用于体外实验的全面方案。
[背景] 人子宫内膜是子宫内层最粘的层。其由柱状上皮和基础基质层组成，其经历循环再生，生长和响应于循环激素的转化。子宫内膜衬里分化为腺分泌表型为囊胚植入和成功怀孕提供了一个好客的环境。在没有怀孕这个层脱落，导致月经。从人子宫内膜活组织检查中分离和培养细胞允许在体外功能评估和与患者结果相关的细胞特征的研究。子宫内膜细胞的分离和培养是研究妇科和产科医学的许多方面的非常宝贵的研究模型，包括不孕，植入失败，复发性流产和月经紊乱。全人子宫内膜活检包含人子宫内膜基质细胞（HESCs），腔和子宫内膜上皮细胞（HEEC），红细胞和免疫细胞的混合群体。 ...
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| Adoptive Transfer of Tumor Expanded Regulatory T Cells (Tregs)
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Author:
Date:
2016-08-20
[Abstract] Regulatory T cells (Tregs), a subset of CD4+CD25+ T cells, infiltrate tumors and suppress antitumor activity of effector T and NK cells. Depletion of Tregs by anti CD25+ antibodies has been shown to reduce tumor growth and metastasis (Olkhanud et al., 2009). Conversely, adoptive transfer of Tregs induced immune suppression and promoted tumor growth (Smyth et al., 2006; Janakiram et al., 2015). We have adoptively transferred Tregs to evaluate their immunosuppressive function in vivo. Our study (Vences-Catalan et al., 2015) compared the immunosuppressive efficacy of Tregs derived from tumor-bearing wild type to those of CD81KO mice. The following protocol could be adapted to any other source of Tregs.
Lymph ...
[摘要] 调节性T细胞（Treg）（CD4 + CD25 + T细胞的子集）浸润肿瘤并抑制效应T和NK细胞的抗肿瘤活性。已显示抗CD25 sup/+抗体减少Treg减少肿瘤生长和转移（Olkhanud等人，2009）。相反，Treg的过继转移诱导免疫抑制并促进肿瘤生长（Smyth等人，2006; Janakiram等人，2015）。我们已经过继转移Treg以评价它们在体内的免疫抑制功能。我们的研究（Vences-Catalan等人，2015）比较了源自荷瘤野生型的Treg与CD81KO小鼠的免疫抑制功效。以下协议可以适用于任何其他来源的Tregs。
通过使用来自MACS Miltenyi Biotec的CD4 + CD25 +调节性T细胞分离试剂盒的两步程序分离和纯化淋巴结或脾肿瘤诱导的Treg。首先，通过阴性选择，然后CD25阳性选择+ T细胞富集CD4 + T细胞。然后将肿瘤诱导的纯化的Treg（CD3 + CD4 CD25 + FoxP3 + 与肿瘤细胞转化为幼稚小鼠（Winn测定）（Winn，1960）。根据研究需要，Treg也可以静脉内注射一次或几次。然后通过测径器或通过体内成像技术测量过继转移的Treg对肿瘤生长的影响。
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