| Mandibular Explant Assay for Investigating Extrinsic Stimuli on Bone and Cartilage Development
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Author:
Date:
2017-12-05
[Abstract] A major issue in developmental biology is to determine how embryonic tissues respond to molecular signals in a timely manner and given the position-restricted instructions during morphogenesis, of which Meckel’s cartilage is a classical example. The ex-vivo explant model is a practical and convenient system that allows investigation of bone and cartilage responses to specific stimuli under a controlled manner that closely mimics the in vivo conditions. In this protocol, the explant model was applied to test whether Meckel’s cartilage and surrounding tissues are responsive to the Endothelin1 (Edn1) signaling molecule and whether it would rescue the phenotype of genetic mutations. The system allows a high degree of manipulation in terms of the concentrations of exogenous ...
[摘要] 发育生物学中的一个主要问题是确定胚胎组织如何及时响应分子信号，并且在形态发生期间给予位置限制指示，其中Meckel软骨是一个经典的例子。 体外外植体模型是一种实用且便利的系统，其允许以受控的方式调查对特定刺激的骨和软骨反应，所述方式严格模拟体内条件。 在这个协议中，外植模型被用来测试Meckel的软骨和周围组织是否对内皮素1（Edn1）信号分子有反应，以及是否会拯救基因突变的表型。 该系统允许在添加到外植体中的外源性化合物的浓度，关于测量下颌骨发育的时间点以及施用外源分子和致畸剂的方法方面进行高度的操作。
【背景】颅面畸形是人类最常见的先天性出生缺陷（Miettinen等人，1999）。许多这些畸形发生在面部形态发生期间，这是一个复杂的多步骤过程，其中颅神经嵴细胞迁移到咽弓以产生许多面部结构（Jin等人，2011）。
特定基因内的两种变异以及基因 - 基因相互作用都可能导致颅面变形。 IRF6基因突变导致头面部外胚层和上皮细胞的形成，导致唇裂，腭裂和下颌畸形。与 IRF6 相比， TWIST1 基因调节胚胎发育期间的神经管闭合和颅骨发育期间的颅缝融合。 TWIST1 ...
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| In vitro Antigen-presentation Assay for Self- and Microbial-derived Antigens
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Author:
Date:
2017-06-05
[Abstract] Antigen presenting cells (APC) are able to process and present to T cells antigens from different origins. This mechanism is highly regulated, in particular by Patter Recognition Receptor (PRR) signals. Here, I detail a protocol designed to assess in vitro the capacity of APC to present antigens derived from bacteria, apoptotic and infected apoptotic cells.
[摘要] 抗原呈递细胞（APC）能够处理和呈递来自不同来源的T细胞抗原。这种机制是高度调节的，特别是通过Patter Recognition Receptor（PRR）信号。在这里，我详细说明了一种设计用于评估体外的APC方案，用于展示来源于细菌，凋亡和感染的凋亡细胞的抗原。
背景 T细胞淋巴细胞在其表面上表达T细胞受体（TCR），其允许识别作为与主要组织相容性复合物（MHC）分子结合的抗原加工和呈递的抗原的细胞（自身）或微生物（非自身）抗原）呈递细胞（APC）。 APC能够处理抗原并将其呈递给T细胞，并且MHC-TCR相互作用是感染和自身免疫应答期间T细胞活化的关键步骤。
＆NBSP;以前的作品已经描述了基于刺激模式识别受体（PRR），例如toll样受体（TLR）（Blander和Medzhitov，2004和2006）的抗原呈递的调节机制。实际上，特异性地来自含有微生物病原体的吞噬体的TLR信号有利于在MHC-II分子内呈递非自身抗原。另一方面，凋亡细胞吞噬后产生的自身抗原由于不存在TLR刺激而导致溶酶体降解。然而，当两者都来自感染的凋亡细胞并且同时由相同的吞噬体携带时，自身和非自身抗原的分离不会发生，其由针对抗原呈递的TLR信号最佳地定制。已经使用骨髓来源的树突状细胞（BMDC）和凋亡性小鼠B细胞 - ...
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| Vascular Smooth Muscle Cell Isolation and Culture from Mouse Aorta
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Author:
Date:
2016-12-05
[Abstract] Vascular smooth muscle cells (SMC) in the ascending thoracic aorta arise from neural crest cells, whereas SMCs in the descending aorta are derived from the presomitic mesoderm. SMCs play important roles in cardiovascular development and aortic aneurysm formation. This protocol describes the detailed process for explanting ascending and descending SMCs from mouse aortic tissue. Conditions for maintenance and subculture of isolated SMCs and characterization of the vascular SMC phenotype are also described.
[摘要] 在升主动脉中的血管平滑肌细胞（SMC）产生于神经嵴细胞，而降主动脉中的SMC来源于presomitic中胚层。 SMC在心血管发育和主动脉瘤形成中起重要作用。该协议描述了从小鼠主动脉组织移出升序和降序的SMC的详细过程。还描述了分离的SMC的维持和传代培养的条件和血管SMC表型的表征。
关键字：组织培养，平滑肌细胞，细胞生物学
[背景] 血管平滑肌细胞肌肉内侧动脉层。较大的弹性动脉，例如主动脉，具有由夹在弹性蛋白纤维之间的对齐的平滑肌细胞组成的多个同心薄片。存在于弹性动脉的内侧层中的弹性蛋白和胶原允许它分布由心脏在整个血管壁产生的力（Wagenseil和Mecham，2009）。相比之下，较小的肌肉动脉仅具有限制平滑肌层的内部和外部弹性层。这些动脉位于动脉树的下游，因此受到血流的作用力较小。
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