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Date:
2016-08-20
[Abstract] Nicotinamide adenine dinucleotide is a coenzyme present in all kingdoms of life and exists in two forms: oxidized (NAD+) and reduced (NADH). NAD(H) is involved in a multitude of essential metabolic redox reactions, providing oxidizing or reducing equivalents. The ratio of free intracellular NAD+/NADH is fundamentally important in the maintenance of cellular redox homeostasis (Ying, 2008). Various chromogenic cycling assays have been used to determine the ratio of NAD+/NADH in both bacterial and mammalian cells for more than forty years (Bernofsky and Swan, 1973; Nisselbaum and Green, 1969).
Here, we describe in detail an assay to determine the ratio of free intracellular NAD+ to NADH in Streptococcus mutans. This cycling ...
[摘要] 烟酰胺腺嘌呤二核苷酸是存在于生命的所有王国中的辅酶，并且以两种形式存在：氧化（NAD +）和还原（NADH）。 NAD（H）参与多种必需的代谢氧化还原反应，提供氧化或还原等价物。游离细胞内NAD + /NADH的比率在维持细胞氧化还原稳态中是根本重要的（Ying，2008）。已经使用各种显色循环测定来测定细菌和哺乳动物细胞中NAD +/NAD +/NADH的比率超过四十年（Bernofsky和Swan，1973; Nisselbaum和Green，1969）。 /> 在这里，我们详细描述了测定变异链球菌中游离细胞内NAD + 与NADH的比率的测定法。该循环测定是Bernofsky和Swan（Bernofsky和Swan，1973）首先描述的方案的修改版本，使用Frezza等人描述的提取缓冲液。 （2011），随后是由Gibbon和Larher描述的减少的MTT降水（Gibon和Larher，1997）。如图1所示，使用乙醇脱氢酶来驱动一系列氧化还原反应，利用来自样品提取物的外源添加的乙醇和NAD +作为初始底物，吩嗪乙硫酸盐（PES）作为电子载体，以及噻唑基蓝色四唑溴化物（MTT）作为末端电子受体。使用6M ...
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