| Isolation of Intact Vacuoles from Petunia Petals and Extraction of Sequestered Glycosylated Phenylpropanoid Compounds
|
|
Author:
Date:
2018-07-05
[Abstract] Plant vacuoles are the largest compartment in plant cells, occupying more than 80% of the cell volume. A variety of proteins, sugars, pigments and other metabolites are stored in these organelles (Paris et al., 1996; Olbrich et al., 2007). Flowers produce a variety of specialized metabolites, some of which are unique to this organ, such as components of pollination syndromes, i.e., scent volatiles and flavonoids (Hoballah et al., 2007; Cna'ani et al., 2015). To study the compounds stored in floral vacuoles, this compartment must be separated from the rest of the cell. To enable isolation of vacuoles, protoplasts were first generated by incubating pierced corollas with cellulase and macrozyme enzymes. After filtering and several centrifugation ...
[摘要] 植物液泡是植物细胞中最大的隔室，占细胞体积的80％以上。各种蛋白质，糖，色素和其他代谢物存储在这些细胞器中（Paris et al。，1996; Olbrich et al。，2007）。花产生多种特殊代谢物，其中一些是该器官特有的，如授粉综合征的成分， ie ，气味挥发物和黄酮类化合物（Hoballah et al。， 2007; Cna'ani et al。，2015）。为了研究存储在花液泡中的化合物，必须将该隔室与细胞的其余部分分开。为了能够分离液泡，首先通过将刺穿的花冠与纤维素酶和macrozyme酶一起孵育来产生原生质体。在过滤和几个离心步骤后，通过显微镜观察显示原生质体与碎片和受损/破裂的原生质体分离。裂解浓缩的原生质体，并通过Ficoll梯度离心提取液泡。 Vacuoles用于隔离代谢物的定量GC-MS分析。这种方法使我们能够将空泡识别为糖基化挥发性苯丙酸类的亚细胞聚集位点，并假设共轭气味化合物在通向顶空的途径中被隔离（Cna'ani et al。，2017） 。
【背景】植物空泡占植物细胞中细胞体积的80％。这些细胞器对植物生长和发育至关重要，在整个植物的生命中具有不同的功能。 ...
|
|
|
| Registration and Alignment Between in vivo Functional and Cytoarchitectonic Maps of Mouse Visual Cortex
|
|
Author:
Date:
2018-02-20
[Abstract] This protocol describes a method for registration of in vivo cortical retinotopic map with cytochrome c oxidase (CO) labeled architectonic maps of the same mouse brain through the alignment of vascular fiducials. By recording surface blood vessel pattern and sequential alignment at each step, this method overcomes the challenge imposed by tissue distortion during perfusion, mounting, sectioning and histology procedures. This method can also be generalized to register and align other types of in vivo functional maps like ocular dominance map and spatial/temporal frequency tuning map with various anatomical maps of mouse cortex.
[摘要] 该协议描述了通过血管基准点的对齐使用细胞色素c氧化酶（CO）标记的相同小鼠脑的构建图来注册体内皮质视网膜地图的方法。 通过记录每个步骤的表面血管图案和顺序对准，该方法克服了在灌注，贴壁，切片和组织学程序期间由组织变形所施加的挑战。 这种方法也可以推广到注册和对齐其他类型的体内功能地图，如眼优势地图和空间/时间频率调整地图与小鼠皮层的各种解剖图。
【背景】通过体内视网膜映射（Marshel等人，2011; Garrett等人，），可以将小鼠视觉皮层分隔成功能上不同的视觉区域。 （Olavarria and Montero，1989; Wang and Burkhalter，2007），或者通过建筑结构辅助的神经元追踪技术，这些不同的视觉区域具有不同的响应特性和皮质皮质连接（Andermann等人，2011; Marshel等人，2011; Roth等人， >，2012; Wang等人，2011和2012）。这些结果表明，鼠标视觉区域形成处理不同类型的视觉信息的分离的视觉流（Murakami等人，2017; Smith等人，2017）。在视觉区域地图的背景下研究鼠标视觉系统对于理解视觉皮层的组织是至关重要的。然而，虽然功能图和结构图大致相似，但是这两幅图显示的并不完美（Zhuang et ...
|
|
|
| Mouse Satellite Cell Isolation and Transplantation
|
|
Author:
Date:
2018-01-20
[Abstract] Satellite cell (SC) transplantation represents a powerful strategy to investigate SC biology during muscle regeneration. We described here a protocol for SC isolation from green fluorescent protein (GFP)-expressing mice and their transplantation into murine muscles. This procedure was originally used to assess the effects of the hormone unacylated ghrelin on muscle regeneration, in particular evaluating how the increase of unacylated ghrelin in the recipient muscle affected the engraftment of donor SCs (Reano et al., 2017).
[摘要] 卫星细胞（SC）移植代表了肌肉再生期间SC生物学研究的强大策略。 我们在这里描述了从绿色荧光蛋白（GFP）表达的小鼠和他们的小鼠肌肉移植SC分离的协议。 该程序最初用于评估激素非酰化生长素释放肽对肌肉再生的影响，特别是评估受体肌肉中未酰化的生长素释放肽的增加如何影响供体SC的植入（Reano等人，2017年）。
【背景】由分化的肌纤维组成的骨骼肌可以在受伤时再生。肌肉再生依赖于居住在肌肉纤维基底层之下的称为卫星细胞（SC）的静止驻留干细胞群（Mauro，1961）。受伤后，SC经历激活，广泛的增殖，分化和融合，最终修复或替换受损的肌纤维（Collins等人，2005）。
由于移植的成肌细胞可以与宿主成肌细胞融合，因此SC的移植被认为是杜氏肌营养不良症（DMD）的潜在疗法多年的时间，这提示了在缺陷纤维中功能性修复的可能性（Partridge ...
|
|
|