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Trypsin-EDTA solution

胰蛋白酶-EDTA溶液

Company: Sigma-Aldrich
Catalog#: T3924
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CRISPR-mediated Tagging with BirA Allows Proximity Labeling in Toxoplasma gondii
Author:
Date:
2018-03-20
[Abstract]  Defining protein interaction networks can provide key insights into how protein complexes govern complex biological problems. Here we define a method for proximity based labeling using permissive biotin ligase to define protein networks in the intracellular parasite Toxoplasma gondii. When combined with CRISPR/Cas9 based tagging, this method provides a robust approach to defining protein networks. This approach detects interaction within intact cells, it is applicable to both soluble and insoluble components, including large proteins complexes that interact with the cytoskeleton and unique microtubule organizing center that comprises the apical complex in apicomplexan parasites. [摘要]  定义蛋白质相互作用网络可以为蛋白质复合物如何控制复杂的生物学问题提供关键信息 在这里我们定义了一种基于接近度的标记方法,使用宽容的生物素连接酶来定义细胞内寄生虫弓形虫的蛋白质网络。 当与基于CRISPR / Cas9的标记结合使用时,这种方法提供了一种可靠的方法来定义蛋白质网络。 这种方法检测完整细胞内的相互作用,它适用于可溶性和不可溶性成分,包括与细胞骨架相互作用的大型蛋白质复合物和独特的微管组织中心,其中包括顶尖复合体在顶尖复合寄生虫中。

【背景】分析蛋白质 - 蛋白质相互作用是解决蛋白质如何组装和作为大分子复合物的关键努力。传统上,通过免疫共沉淀(共-IP)和随后的质谱分析已经鉴定出蛋白质复合物。然而,一些蛋白质复合物取代基可能在co-IP的裂解,下拉和洗涤步骤期间人为失去或获得,这对于不溶性膜或需要侵蚀性溶解的结构蛋白质尤其成问题。作为co-IP的替代物,邻近依赖性生物素鉴定(BioID)提供了在正常细胞稳态期间紧邻目标靶蛋白的蛋白质“快照”(Roux等人,2012年)。 BioID利用融合到感兴趣的靶蛋白的混杂的大肠杆菌生物素蛋白连接酶(BirA)。生物素补充使得BirA融合物在30纳米内允许生物素化的近邻生物体(Roux et al。,2012; Van Itallie et al。,2013) ...

Conditional Knockdown of Proteins Using Auxin-inducible Degron (AID) Fusions in Toxoplasma gondii
Author:
Date:
2018-02-20
[Abstract]  Toxoplasma gondii is a member of the deadly phylum of protozoan parasites called Apicomplexa. As a model apicomplexan, there is a great wealth of information regarding T. gondii’s 8,000+ protein coding genes including sequence variation, expression, and relative contribution to parasite fitness. However, new tools are needed to functionally investigate hundreds of putative essential protein coding genes. Accordingly, we recently implemented the auxin-inducible degron (AID) system for studying essential proteins in T. gondii. Here we provide a step-by-step protocol for examining protein function in T. gondii using the AID system in a tissue culture setting. [摘要]  弓形虫是原生动物寄生虫称为Apicomplexa致命门的一员。 作为一个复杂的模型,关于T的信息有很多。 gondii的8,000多种蛋白质编码基因,包括序列变异,表达和对寄生虫适应的相对贡献。 然而,需要新的工具来功能性地调查数百个推定的必需蛋白质编码基因。 因此,我们最近实施了生长素诱导降解(AID)系统来研究T中的基本蛋白质。弓形虫。 在这里,我们提供了一个检查蛋白质功能的一步一步的协议。 在组织培养环境中使用AID系统。

【背景】生长素是一类通过靶向某些蛋白质在植物中进行蛋白酶体降解而发出信号的植物激素(Teale等人,2006)。 Kohei Nishimura等人具有将该植物特异性信号传导系统的组分转移到其他真核生物中用于有兴趣的蛋白质(POI)的条件调节,创建生长素诱导降解(AID)系统的聪明想法(Nishimura等人,2009)。这个系统已经被成功地用于几种真核生物,包括疟原虫疟原虫(Kreidenweiss et al。,2013; Philip和Waters,2015)。只需要两个转基因成分来实现这个系统,称为转运抑制剂反应1(TIR1)的植物生长素受体和用AID标记的POI。用生长素(例如,3-吲哚乙酸/ IAA)处理活化SCF ...

Adhesion and Invasion Assay Procedure Using Caco-2 Cells for Listeria monocytogenes
Author:
Date:
2017-05-05
[Abstract]  Listeria monocytogenes is an important Gram-positive foodborne pathogen that is a particular problem in ready-to-eat food. It has an ability to survive in harsh conditions like refrigeration temperatures and high salt concentrations and is known to cross intestinal, placental and blood-brain barriers. Several cancerous cell lines like cervical, liver, dendritic, intestinal and macrophages have been used to study in vitro propagation and survival of listeria in human cells. Human intestinal epithelial cells have been used to study how listeria crosses the intestinal barrier and cause infection. The protocol in this articles describes the procedures to grow Caco-2 cells, maintain cells and use them for adhesion and invasion assays. During adhesion assay the cells are ... [摘要]  单核细胞增生利斯特氏菌是一种重要的革兰氏阳性食源性病原体,是即食食品中的一个特殊问题。它具有在诸如制冷温度和高盐浓度的恶劣条件下生存的能力,并且已知可以穿过肠,胎盘和血脑屏障。已经使用了诸如子宫颈,肝脏,树突状细胞,肠和巨噬细胞的几种癌细胞系来研究人细胞中李斯特菌的体外扩增和存活。人肠上皮细胞已被用于研究李斯特菌如何穿过肠屏障并引起感染。本文中的方案描述了生长Caco-2细胞的过程,维持细胞并将其用于粘附和侵袭测定。在粘附测定期间,将细胞与李斯特菌孵育30分钟,但是在侵袭测定中,细胞生长在感染后的几个时间点被停止以监测细胞中李斯特菌的生长和存活率。

背景 ...

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