| Thermal Stability of Heterotrimeric pMHC Proteins as Determined by Circular Dichroism Spectroscopy
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Author:
Date:
2017-07-05
[Abstract] T cell receptor (TCR) recognition of foreign peptide fragments, presented by peptide major histocompatibility complex (pMHC), governs T-cell mediated protection against pathogens and cancer. Many factors govern T-cell sensitivity, including the affinity of the TCR-pMHC interaction and the stability of pMHC on the surface of antigen presenting cells. These factors are particularly relevant for the peptide vaccination field, in which more stable pMHC interactions could enable more effective protection against disease. Here, we discuss a method for the determination of pMHC stability that we have used to investigate HIV immune escape, T-cell sensitivity to cancer antigens and mechanisms leading to autoimmunity.
[摘要] 由肽主要组织相容性复合物（pMHC）提供的外源肽片段的T细胞受体（TCR）识别控制T细胞介导的针对病原体和癌症的保护。 许多因素控制T细胞敏感性，包括TCR-pMHC相互作用的亲和力和pMHC在抗原呈递细胞表面的稳定性。 这些因素对于肽疫苗接种领域尤其重要，其中更稳定的pMHC相互作用可以实现更有效的防止疾病的保护。 在这里，我们讨论一种测定pMHC稳定性的方法，我们已经用来调查HIV免疫逃逸，T细胞对癌症抗原的敏感性和导致自身免疫的机制。
【背景】CD8 + T细胞对外来入侵者或失调自身的反应的能力取决于细胞表面上稳定的pMHC I类（pMHCI）表达。在结构上，MHCI分子在α1和α2结构域之间的界面处形成由两个平行的α螺旋形成的肽结合槽，其具有β片的底部（Latron等人，1992）。肽结合槽具有与结合肽的N-和C-末端紧密相互作用的特异性氨基酸的主要肽结合口袋（B和F）。虽然这些口袋可以适应一系列氨基酸，但它们表现出对使用结构和生物化学方法表征的某些侧链的偏好（Parker等人，1992）。该信息已被用于产生所谓的“异型”肽，其中具有差的MHC锚的天然肽可以用与MHC最佳结合的氨基酸进行修饰（Cole等人，2010 ...
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| Isolation and Flow-cytometric Analysis of Mouse Intestinal Crypt Cells
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Author:
Date:
2015-11-05
[Abstract] The intestinal epithelial layer forms tubular invaginations into the underlying connective tissue of the lamina propria. These structures, termed crypts, are the basic functional unit of the intestine. Colon crypts and the surrounding lamina propria house different cell types, including epithelial cells, stem cells, enterocytes, goblet cells, as well as cells of the innate and adaptive immune systems (Clevers, 2013; Mowat and Agace, 2014). Here we describe a technique for the isolation of mouse intestinal crypt cells as well as their characterization by flow cytometry analysis (FACS) (Del Reino et al., 2012).
[摘要] 肠上皮层形成管状内陷到固有层的下面的结缔组织。 这些结构，称为隐窝，是肠的基本功能单位。 结肠隐窝和周围固有层存在不同的细胞类型，包括上皮细胞，干细胞，肠细胞，杯状细胞，以及先天和适应性免疫系统的细胞（Clevers，2013; Mowat和Agace，2014）。 在这里我们描述了用于分离小鼠肠道隐窝细胞的技术以及它们通过流式细胞术分析（FACS）的表征（Del Reino等人，2012）。
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| Isolation of Particles of Recombinant ASC and NLRP3
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Author:
Date:
2015-05-20
[Abstract] NLRP3 inflammasome is a multiprotein complex responsible for the activation of inflammatory caspase-1, resulting in processing and release of pro-inflammatory cytoquines IL-1β and IL-18 (Schroder and Tschopp, 2010). This inflammasome is composed of the sensor protein NLRP3 connected to caspase-1 through the adaptor protein ASC (apoptosis-associated speck-like protein with a caspase-recruitment domain) (Schroder and Tschopp, 2010). We and others have reported that upon inflammasome activation functional oligomeric inflammasome particles of NLRP3 and ASC were released from cells, acting as danger signals to amplify inflammation by promoting the activation of caspase-1 extracellularly (Baroja-Mazo et al., 2014; Franklin et al., 2014).
Studying the extracellular ...
[摘要] NLRP3炎症小体是负责炎症半胱天冬酶-1活化的多蛋白复合物，导致促炎细胞因子IL-1β和IL-18的加工和释放（Schroder和Tschopp，2010）。这种炎症小体由通过衔接蛋白ASC（凋亡相关的斑点样蛋白与半胱氨酸蛋白酶募集结构域）连接到caspase-1的传感蛋白NLRP3组成（Schroder和Tschopp，2010）。我们和其他人已经报道，在炎症小体激活时，NLRP3和ASC的功能性寡聚炎症小体颗粒从细胞中释放，充当危险信号，通过促进细胞外caspase-1的活化来扩增炎症（Baroja-Mazo等，
通过纯化ASC的重组颗粒或组成型激活的NLRP3突变体来研究寡聚ASC和NLRP3炎症小体颗粒的细胞外功能是可能的与相关的cryopyrin相关周期性综合征（CAPS，突变p.D303N），都标记有黄色荧光蛋白（YFP），并在HEK293细胞中表达。通过重组ASC或突变体NLRP3在HEK293细胞中的表达导致它们自发聚集成斑点（Baroja-Mazo等人，2014）的事实促进了纯化过程，并且方案最初从Fernandes-Alnemri和Alnemri（2008年）。
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