| MAMP-triggered Medium Alkalinization of Plant Cell Cultures
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Author:
Date:
2020-04-20
[Abstract] Plants recognize a wide variety of microbial molecules to detect and respond to potential invaders. Recognition of Microbe-Associated Molecular Patterns (MAMPs) by cell surface receptors initiate a cascade of biochemical responses that include, among others, ion fluxes across the plasma membrane. A consequence of such event is a decrease in the concentration of extracellular H+ ions, which can be experimentally detected in plant cell suspensions as a shift in the pH of the medium. Thus, similarly to reactive oxygen species (ROS) accumulation, phosphorylation of MAP kinases and induction of defense-related genes, MAMP-induced medium alkalinization can be used as a proxy for the activation of plant immune responses. Here, we describe a detailed protocol for the measurement of ...
[摘要] [摘要 ] 植物识别多种微生物分子以检测和响应潜在的入侵者，通过细胞表面受体识别微生物相关的分子模式（MAMP）引发一系列生化反应，其中包括跨血浆的离子通量此类事件的后果是细胞外H + 离子浓度降低，这可以通过实验检测到植物细胞悬浮液中培养基pH值的变化，因此类似于活性氧（ROS）积累， MAP激酶的磷酸化和防御相关基因的诱导，MAMP诱导的培养基碱化可以用作激活植物免疫反应的代理。在这里，我们描述了测量烟草BY-2细胞培养基碱化的详细方案两种不同MAMP处理后的悬浮液：衍生自真菌细胞壁的壳六聚体（NAG6； N-乙酰氨基葡萄糖）和鞭毛蛋白表位flg22 ，在细菌鞭毛发现。氏S分析提供了可靠和快速的平台来访问毫安时触发免疫（在MTI）在烟草悬浮细胞，并且可以很容易地适应其他植物物种以及其他毫安。
[背景 ] 在整个进化过程中，植物都具有检测微生物衍生分子并建立起能够抓住有害相互作用的免疫反应的能力（Boutrot和Zipfel，2017年）。诱导此类免疫反应的微生物相关分子模式（MAMP）通常被广泛保存。微生物的结构成分，例如真菌的几丁质和细菌的鞭毛蛋白（Cook 等人，2015）。胞外植物受体对MAMP的识别会导致MAMP触发的免疫（MTI），从而阻止微生物入侵并维持植物健康。（Böhmet al。，2014）。
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| Evaluation of Root pH Change Through Gel Containing pH-sensitive Indicator Bromocresol Purple
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Author:
Date:
2018-04-05
[Abstract] The Rapid Alkalinization Factor (RALF) is a plant hormone peptide that inhibits proton transport causing alkalinization of the extracellular media. To detect the alkalinization response elicited by RALF peptides in root cells, Arabidopsis seedlings are carefully transferred to a gel containing the pH-sensitive indicator bromocresol purple, treated with the peptide and photographed after 30 min. Herein the protocol is optimized for evaluation of exogenous treatment, described in detail and expected results are presented.
[摘要] 快速碱化因子（RALF）是一种植物激素肽，可抑制质子转运，导致细胞外培养基碱化。 为了检测由根细胞中的RALF肽引发的碱化反应，将拟南芥幼苗仔细转移至含有pH敏感指示剂溴甲酚紫紫的凝胶中，用肽处理并在30分钟后拍照。 在此，该方案针对外源性治疗的评估进行了优化，详细描述并呈现预期结果。
【背景】质子运输是由无数的信号引起的，并被植物用来协调增长，防御和发展。一些植物激素肽可以影响质子转运，引起细胞外基质强碱性化（Felix和Boller，1995; Pearce等人，2001a）。 5kDa肽激素快速碱化因子（RALF）在分泌后与其受体FERONIA结合，并导致质膜H + - 腺苷三磷酸酶2的磷酸化，抑制质子转运并碱化细胞外培养基（Pearce等人，2001b; Haruta等人，2014）。
含有pH指示剂溴甲酚紫的生长培养基是在根周围的培养基中观察碱化或酸化的有效方法。先前已经使用该方法来表明NaRALF是调节根毛细胞外pH所需的（Wu等人，2007），并且过表达AtRALF23的植物的根具有降低的将根际酸化的能力（Srivastava ，2009）。 Masachis等人也使用pH指示剂溴甲酚紫紫色的生长培养基。 （2016）证明由真菌病原体产生的RALF同源物诱导了番茄植物根周围的培养基的碱化。
我们已经优化了pH指示剂溴甲酚紫方案，并且使用改进的方案，我们能够在AtRALF1处理后在野生型和突变体幼苗中观察到拟南芥根部周围的碱化作用（Dressano等人， ...
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| Polyamine and Paraquat Transport Assays in Arabidopsis Seedling and Callus
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Author:
Date:
2017-08-05
[Abstract] Polyamines (PAs) are polycationic compounds found in all living organisms and play crucial roles in growth and survival. We here show the ‘Polyamine and paraquat (PQ) transport assay’ protocol, which can be used to examine the uptake activity of PA/PQ transporters. We have used this protocol to demonstrate that PUT3 in Arabidopsis is a polyamine transporter and is able to take up spermidine and its analog paraquat.
[摘要] 多胺（PA）是在所有生物体中发现的聚阳离子化合物，在生长和生存中起关键作用。 我们在这里展示了“多胺和百草枯（PQ）运输测定”方案，可用于检查PA / PQ转运蛋白的摄取活性。 我们已经使用该协议来证明拟南芥中的PUT3是多胺转运蛋白，并且能够吸收亚精胺及其类似百草枯。
【背景】PA通过与阴离子大分子如DNA，RNA和蛋白质的功能相互作用和调节而参与基因调控。 在活细胞中，必须调节PA的含量以维持细胞止血。 在高等植物中，三种主要的多胺，腐胺（Put），亚精胺（Spd）和精胺（Spm）以游离形式或缀合形式与其他分子一起存在（Gill和Tuteja，2010）。 在酵母中，鉴定了四种质膜多胺转运体DUR3，SAM3，GAP1和AGP2（Uemura等人，2007）。 在拟南芥中，鉴定了5种推定的多胺摄取转运蛋白（PUT1-PUT5），并且PUT1-3已被实验验证为多胺转运蛋白（Mulangi等人，2012; Li et al，2013）。 我们以下所述的方案成功证实了PUT3是多胺和百草枯的流入转运蛋白，并且在Put3突变体（Shen等人，2016）中PQ /Spd吸收受损）。
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