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Penicillin-Streptomycin

青霉素 - 链霉素

Company: Lonza
Catalog#: 17-602E
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Murine Pancreatic Islets Transplantation under the Kidney Capsule
Author:
Date:
2018-03-05
[Abstract]  Type 1 diabetes (T1D) is an autoimmune disease caused by the lack of insulin-producing pancreatic beta cells leading to systemic hyperglycemia. Pancreatic islet transplantation is a valid therapeutic approach to restore insulin loss and to promote adequate glycemic control. Pancreatic islet transplantation in mice is an optimal preclinical model to identify new therapeutic strategies aiming at preventing rejection and optimizing post-transplant immuno-suppressive/-tolerogenic therapies.

Islet transplantation in preclinical animal models can be performed in different sites such the kidney capsule, spleen, bone marrow and pancreas. This protocol describes murine islet transplantation under the kidney capsule. This is a widely accepted procedure for research purposes. Stress ...
[摘要]  1型糖尿病(T1D)是由于缺乏产生胰岛素的胰腺β细胞导致系统性高血糖症而引起的自身免疫性疾病。 胰岛移植是恢复胰岛素损失和促进充分血糖控制的有效治疗方法。 小鼠胰岛移植是一种最佳的临床前模型,用于鉴定旨在预防排斥和优化移植后免疫抑制/抗原治疗的新治疗策略。

临床前动物模型中的胰岛移植可以在不同部位进行,如肾囊,脾脏,骨髓和胰腺。 该协议描述了肾囊下的鼠胰岛移植。 这是一个被广泛接受的研究目的。 动物造成的压力很小,并导致可靠和可重复的结果。

【背景】迄今为止在小动物模型中报道了许多用于胰岛植入的备选位置,并且必须根据要使用的程序的技术优势和实验目的来选择理想的位点。 考虑到肾囊是一种血管外部位,并且它没有免疫保护,肾囊下的胰岛移植仍然是一种低死亡率的手术过程,导致几天内高血糖症逆转。 另外,肾囊下的移植允许组织学研究和胰岛功能的正式证明(Cantarelli和Piemonti,2011; Elisa Cantarelli等人,2013)。

Staining of Membrane Receptors with Fluorescently-labeled DNA Aptamers for Super-resolution Imaging
Author:
Date:
2017-09-05
[Abstract]  One of the most prominent applications of fluorescent super-resolution microscopy is the study of nanodomain arrangements of receptors and the endocytic pathway. Staining methods are becoming crucial for answering questions on the nanoscale, therefore, the use of small and monovalent affinity probes is of great interest in super-resolution microscopy with biological samples. One kind of affinity probe is the aptamer. Aptamers are single DNA or RNA sequences that bind with high affinity to their targets and due to their small size they are able to (i) place the fluorophore in close proximity to the protein of interest and (ii) bind to most of the protein of interest overcoming the steric hindrance effect, resulting in better staining density. Here we describe a detailed protocol with which ... [摘要]  荧光超分辨率显微镜的最突出的应用之一是研究纳米结构的受体和内吞途径。染色方法对于回答纳米尺度的问题变得至关重要,因此,使用小型和单价亲和探针在具有生物样品的超分辨显微镜中是非常有意义的。一种亲和力探针是适体。适配体是以高亲和力结合其靶标的单个DNA或RNA序列,并且由于它们的小尺寸,它们能够(i)将荧光团置于感兴趣的蛋白质附近,并且(ii)与大部分蛋白质结合有利于克服空间位阻效应,导致更好的染色密度。在这里,我们描述一个详细的协议,使用适配体染色活细胞,并用刺激的排放消耗(STED)显微镜对其进行成像。在该方案中,染色用市售适用于靶向表皮生长因子受体(EGFR),人表皮生长因子受体2(HER2或ErbB2)和ephrin-A受体2(Epha2)的适体进行。由于适配体可与大部分受欢迎的荧光团偶联,因此我们认为本文介绍的方法可扩展到目前超分辨率显微镜技术的绝大多数。
【背景】超分辨率成像技术的最新进展已经导致搜索更精确的方法来标记细胞元件。衍射无限成像仪器提供优异的分辨率,然而标准样品染色方法,如免疫染色,缺乏检测细胞元素所必需的精度。由于它们的大尺寸(长度约15nm)和高分子量(〜150kDa),抗体可以很差地渗透到生物样品中。另外,一次/二次抗体复合物将荧光团放置在远离靶的大约25nm处,从而损害检测精度。此外,由于初级/二级抗体复合物的大尺寸,由于空间位阻(Fornasiero和Opazo,2015),较小部分的靶标可以被标记。这导致较低的标记密度,这是超分辨率显微镜的关键参数,特别是在识别和描述纳米结构时。为了克服这些问题,近年来已经测试了与单个靶(单价)结合的小的亲和力探针,如适体,亲和体或纳米体系(Rothbauer ...

Isolation of Murine Alveolar Type II Epithelial Cells
Author:
Date:
2017-05-20
[Abstract]  We have optimized a protocol for isolation of alveolar type II epithelial cells from mouse lung. Lung cell suspensions are prepared by intratracheal instillation of dispase and agarose followed by mechanical disaggregation of the lungs. Alveolar type II epithelial cells are purified from these lung cell suspensions through magnetic-based negative selection using a Biotin-antibody, Streptavidin-MicroBeads system. The purified alveolar type II epithelial cells can be cultured and maintained on fibronectin-coated plates in DMEM with 10% FBS. This protocol enables specific investigation of alveolar type II epithelial cells at molecular and cellular levels and provides an important tool to investigate in vitro the mechanisms underlying lung pathogenesis. [摘要]  我们优化了从小鼠肺分离肺泡II型上皮细胞的方案。通过气管内滴注分泌酶和琼脂糖,然后机械解聚肺来制备肺细胞悬浮液。通过使用生物素抗体Streptavidin-MicroBeads系统的磁性阴性选择,从这些肺细胞悬液中纯化肺泡II型上皮细胞。可以将纯化的肺泡II型上皮细胞培养并维持在含有10%FBS的DMEM中的纤连蛋白包被的平板上。该方案能够在分子和细胞水平上对肺泡II型上皮细胞进行特异性研究,并提供了一种重要的工具,用于在体外研究肺发病机制的机制。

背景 肺泡II型上皮细胞在肺泡完整性维持,表面活性蛋白合成和分泌中起关键作用,并防止细菌和病毒的肺部感染。最近使用小鼠肺癌模型的研究已经证明,肺泡II型上皮细胞是由化学致癌物质和致癌突变诱导的腺瘤/腺癌的关键细胞(Qu 等人,2015; Zhou > et al。,2015和2017)。为了进一步扩大我们对肺泡II型上皮细胞在体内肺发病机制中的作用的理解,需要分离肺泡II型上皮细胞以允许体外精确的机理分析, EM>。基于先前的研究(Corti等人,1996; Rice等人,2002),在我们的实验室中使用了一种修饰的方法来分离高度纯化的,可行的和可培养的来自小鼠的肺泡II型上皮细胞(Zhou等人,2015; Sun等人,2016)。

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