| In vitro Nitrate Reductase Activity Assay from Arabidopsis Crude Extracts
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Author:
Date:
2018-04-05
[Abstract] Nitrate reductase (NR) reduces the major plant nitrogen source, NO3-, into NO2-. NR activity can be measured by its final product, nitrite through its absorbance under optimized condition. Here, we present a detailed protocol for measuring relative enzyme activity of NR from Arabidopsis crude extracts. This protocol offers simple procedure and data analysis to compare NR activity of multiple samples.
[摘要] 硝酸还原酶（NR）将主要的植物氮源NO 3 N-2还原为NO 2 - 2。 NR活性可以通过其最终产物，亚硝酸盐在最佳条件下通过其吸光度来测量。 在这里，我们提供了一个详细的协议，用于测量来自拟南芥粗提物的NR的相对酶活性。 该协议提供简单的程序和数据分析来比较多个样品的NR活性。
【背景】氮是植物所需的主要营养素，主要以硝酸盐的形式吸收。硝酸还原酶是高等植物中首次同化氮的酶。植物硝酸还原酶的同型二聚体如下催化硝酸根的NAD（P）H依赖性还原为亚硝酸根：
NO <3> + NADH + H +→NO - + NAD + H 测量NR活性的方法可能是研究影响NR活性的生物因素的有力工具（Park等人，2011）。氮同化影响植物中氨基酸的含量，因此调节NR活性可用于提高某些作物的质量（Croy和Hageman，1970; Dalling和Loyn，1977; Ruan等人，1998） ）。在该协议中，在优化的缓冲液条件下限制时间内亚硝酸盐浓度增加作为可比值获得。亚硫酸盐浓度通过Griess测定法通过其在540nm处的吸光度来测量。简言之，亚硝酸盐与磺胺酸形成重氮盐，然后N-（1-萘基）乙二胺二盐酸盐形成有色偶氮化合物。可以比较这些值以确定样品如何具有不同的NR活性。此外，通过简单的过程可以将这些数值转换为精确增加的亚硝酸盐浓度。 ...
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| Axenic Cultivation of Mycelium of the Lichenized Fungus, Lobaria pulmonaria (Peltigerales, Ascomycota)
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Author:
Date:
2015-07-05
[Abstract] Lichens are symbiotic organisms consisting of a fungal partner (the mycobiont) and one or more algal or cyanobacterial partners (the photobiont); moreover lichen thalli comprise a plethora of epi- and endobiotic bacteria and non-lichenized fungi. Genetic markers are the most promising tools for the study of fungal diversity. However, applying genetic methods to intimately admixed symbiotic organisms typically requires the development of species-specific genetic markers, since DNA extraction from environmental specimens implicates the acquirement of total DNA of all symbionts and their cohabitants. While the cultivation of the alga is straight forward, the axenic cultivation of lichen-forming fungi is more difficult due to their very slow growth, as compared with the majority of ...
[摘要] 地衣是由真菌伴侣（分枝杆菌）和一个或多个藻类或蓝藻合作伙伴（photobiont）组成的共生生物;此外，地衣thalli包括过多的表皮和内生菌和非地衣真菌。遗传标记是真菌多样性研究最有希望的工具。然而，将遗传方法应用于紧密混合的共生生物通常需要开发物种特异性遗传标记，因为从环境样品中提取DNA涉及获得所有共生体及其同居者的总e DNA。虽然藻类的培养是直接的，但是与大多数非地衣类群相比，由于其生长非常缓慢，形成地衣的真菌的无性繁殖更加困难，并且在内部存在腐生，内生和寄生真菌地衣thallus。此外，形成地衣的真菌（主要是子囊菌，少数担子菌）是营养不良的生物，因此适应营养不良的条件;在营养丰富的培养基中，如通常用于大规模生产快速生长的腐生真菌的无菌培养中，它们经常自动毒害。大多数形成地衣的真菌不是专性生物营养的，因此可以在非共生状态下培养。
在这里，我们提出了一种用于分离形成地衣的子囊菌无菌培养和作为纯真菌DNA来源的菌丝体培养。我们描述从发芽子囊孢子在琼脂平板上的无菌培养的开始，并解释在液体培养基中的体外生长的优化。通过研磨几个密集的，只有离心生长的真菌菌落，用匀浆器，我们获得许多较小的，生长良好的菌落，因此更高量的菌丝体用于DNA或RNA分离（Honegger和Bartnicki-Garcia，1991）。
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