| Quantification of Plant Cell Death by Electrolyte Leakage Assay
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Author:
Date:
2018-03-05
[Abstract] We describe a protocol to measure the electrolyte leakage from plant tissues, resulting from loss of cell membrane integrity, which is a common definition of cell death. This simple protocol is designed to measure the electrolyte leakage from a tissue sample over a time course, so that the extent of cell death in the tissue can be monitored dynamically. In addition, it is easy to handle many tissue samples in parallel, which allows a high level of biological replication. Although the protocol is exemplified by cell death in Arabidopsis in response to pathogen challenge, it is easily applicable to other types of plant cell death.
[摘要] 我们描述了测量植物组织中电解质渗漏的方案，其由细胞膜完整性的丧失导致，这是细胞死亡的常见定义。 这个简单的方案设计用于测量组织样本在一段时间内的电解质泄漏，从而可以动态监测组织中细胞死亡的程度。 另外，平行处理许多组织样品很容易，这允许高水平的生物复制。 尽管该方案以响应病原体攻击的拟南芥中的细胞死亡为例，但它很容易应用于其他类型的植物细胞死亡。
【背景】当细胞死亡并丧失细胞膜的完整性时，电解质如K +离子就会从细胞中渗出。因此，我们可以使用组织中泄漏的电解质的量作为组织中细胞死亡程度的代表。量化从组织泄漏的电解质的简单方法是测量含有将死细胞的组织的水的电解电导率的增加。这种电解质渗漏测定法已经应用于植物组织，以评估响应于生物和非生物胁迫而死亡的细胞的相对数量，所述细胞例如病原体攻击，昆虫食草，伤口，UV辐射，氧化应激，盐度，干旱，寒冷和热压力（Demidchik et al。，2014）。
最初的方法被设计成测量含有植物组织的水浴溶液在煮沸之前和之后的电导率，其中煮沸后的电导率被用于使组织尺寸差异标准化（Whitlow等人，1992年）。在这里我们描述了一个程序，通过在多个时间点测量叶片浮在12孔板上的水的电解电导率来动态监测叶盘中的电解质渗漏。可以合理地假设来自相同大小的组织样品的电解质的总量，例如从类似发育阶段的叶子冲出的相同面积的圆盘是相当的，并且没有必要测量电解质电导率之后煮沸组织。我们用细菌病原体，即丁香假单胞菌 ...
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| Biotinylation and Purification of Surface-exposed Helicobacter pylori Proteins
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Author:
Date:
2015-04-20
[Abstract] Interactions between pathogenic bacteria and host cells are often mediated by proteins found on the surfaces of the bacteria. The Gram-negative bacterium Helicobacter pylori is predicted to produce at least 50 surface-exposed outer membrane proteins, but there has been relatively little progress in experimentally analyzing the cell-surface proteome of this organism. Herein, we describe in detail a protocol that allows biotinylation and purification of surface-exposed H. pylori proteins. A comparative analysis of surface-exposed proteins identified by this biotinylation-based approach and by several other independent methods is described in a recent publication (Voss et al., 2014).
[摘要] 病原细菌和宿主细胞之间的相互作用通常由在细菌表面上发现的蛋白介导。 革兰氏阴性细菌幽门螺杆菌预计产生至少50个表面暴露的外膜蛋白，但是在实验分析该生物体的细胞表面蛋白质组中相对较少的进展。 在本文中，我们详细描述了允许表面暴露的H的生物素化和纯化的方案。 幽门螺杆菌蛋白。 在最近的出版物（Voss等人，2014）中描述了通过这种基于生物素化的方法和几种其它独立方法鉴定的表面暴露蛋白的比较分析。
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