| Imaging the Pharynx to Measure the Uptake of Doxorubicin in Caenorhabditis elegans
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Author:
Date:
2017-05-20
[Abstract] Caenorhabditis elegans offers an array of advantages to investigate the roles of uptake transporters. Herein, an epifluorescent microscopy approach was developed to monitor the uptake of the autofluorescent anticancer drug, doxorubicin, into the pharynx of C. elegans by organic cation transporters.
[摘要] 秀丽隐杆线虫提供了一系列优势来调查摄取转运蛋白的作用。在这里，开发了荧光显微镜方法来监测自发荧光抗癌药物多柔比星进入C的咽部。有机阳离子转运蛋白。
背景 人类细胞具有超过450个溶质载体转运蛋白，其被认为有助于摄取几种离子，营养物质以及治疗和抗癌药物（Cesar-Razquin等人，2015）。然而，大量这些摄取转运蛋白的作用和底物是未知的。线虫是一种廉价的模型生物体，它比哺乳动物细胞提供了许多优点，可以快速研究许多高度保守的生物过程。在过去十年中，这种生物一直在几个药物发现计划中发挥作用，以鉴定新型小分子，例如，作为抗微生物剂和抑制氧化应激的小分子，尽管生物活性化合物的产量不太明显（Burns等人，2010; O'Reilly等人，，2014）。我们认为如果通过摄取转运蛋白进入动物细胞的分子更多和选择性地流入，则回收率可能更高。迄今为止，已经进行了三项研究以了解摄取转运蛋白在C中的作用。 elegans （Wu et al。，1999; Cheah等人，2013; Papaluca和Ramotar，2016）。因此，该生物体中摄取转运蛋白的功能和底物特异性的表征将有利于改进用于鉴定新生物活性分子的策略。在这里，我们概述了一种监测抗癌药物多柔比星摄入到C的咽中的方法。 elegans （Papaluca和Ramotar，2016）。多柔比星自发荧光可以通过几种广泛可用的检测系统如荧光显微镜来监测。我们注意到，从这种方法可以获得若干好处，包括通过竞争多柔比星摄取来寻找转运蛋白的新型治疗底物。 ...
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| DNA Slot Blot Repair Assay
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Author:
Date:
2015-04-20
[Abstract] Ultraviolet (UV) irradiation induces helix distorting photolesions such as cyclobutane pyrimidine dimers (CPD) and pyrimidine-pyrimidone (6-4) photoproducts (6-4PP) which threaten genomic integrity if unrepaired. In mammals, nucleotide excision repair (NER) is the only pathway that removes UV-induced DNA damages. Here we describe DNA slot blot repair assay for quantitative detection of NER activity using DNA damage specific antibodies such as anti-CPD and anti-6-4PP. Briefly, genomic DNA irradiated with UV was isolated from cells, and the genomic DNA was vacuum-transferred to a nitrocellulose membrane using a Bio-Dot SF microfiltration apparatus (Bio-Rad). A monoclonal antibody that recognizes CPD or 6-4PP was applied to detect the remaining amount of photolesions in the genomic DNA. For ...
[摘要] 紫外线（UV）照射诱导螺旋扭曲光致损伤，例如环丁烷嘧啶二聚体（CPD）和嘧啶 - 嘧啶酮（6-4）光产物（6-4PP），如果未修复则威胁基因组完整性。 在哺乳动物中，核苷酸切除修复（NER）是去除UV诱导的DNA损伤的唯一途径。 在这里我们描述DNA狭缝印迹修复测定NER活性使用DNA损伤特异性抗体如抗CPD和抗6-4PP的定量检测。 简言之，从细胞中分离用UV照射的基因组DNA，使用Bio-Dot SF微量过滤装置（Bio-Rad）将基因组DNA真空转移到硝酸纤维素膜上。 应用识别CPD或6-4PP的单克隆抗体来检测基因组DNA中残留的光损伤量。 对于均匀负载的上样控制，可以通过SYBR金染色进一步分析DNA在膜上。
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