| Fluorescence Measurement and Calibration of Intracellular pH in Starfish Oocytes
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Author:
Date:
2020-10-05
[Abstract] Oocyte maturation is a process wherein an oocyte arrested at prophase of meiosis I resumes meiosis to become a fertilizable egg. In starfish ovaries, a hormone released from follicle cells activates the oocytes, resulting in an increase in their intracellular pH (pHi), which is required for spindle assembly. Herein, we describe a protocol for pHi measurement in living oocytes microinjected with the pH-sensitive dye BCECF. For in vivo BCECF calibration, we treated oocytes with artificial seawater containing CH3COONH4 to clamp pHi, injected pH-standard solutions, and converted the BCECF fluorescence intensity ratios to pHi values. Of note, if the actual pHi is higher or lower than the known pH of injected ...
[摘要] [摘要]卵母细胞成熟是在减数分裂I前期停滞的卵母细胞恢复减数分裂成为可受精卵的过程。在海星卵巢中，从卵泡细胞释放的激素激活卵母细胞，导致其胞内pH（pH i ）升高，这是纺锤体组装所必需的。在本文中，我们描述了在用pH敏感染料BCECF显微注射的活卵母细胞中测量pH i的方案。对于在体内BCECF校准，我们用含有CH人造海水的卵母细胞3 COONH 4到夹具的pH我 ，注入pH标准溶液，并将BCECF荧光强度比值转换为pH i值。值得注意的是，如果实际pH值我比注入标准溶液的pH值已知更高或更低时，BCECF的荧光强度比将分别减小或增大。另一方面，注入溶液的pH值没有显示出荧光强度的变化，应该认为是实际pH值i 。这些用于pH i校准和钳制的方法简单且可重现。
关键词：细胞内pH，BCECF ，卵母细胞，显微注射，海星，标定
[背景]细胞内pH （pH为我）测量为细胞生物学的研究中是非常有用的方法，因为pH值我起着在多种细胞过程中起重要作用，如配子活化（约翰逊和EPEL ，1976; Shen和斯坦哈特，1978 ;蒂尔尼等，1978 ），细胞分裂（Schuldiner和Rozengurt ，1982; Moolenaar译者等，1983;阿南德和普拉萨德，1989; ...
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| Purification of 70S Ribosomes from Bacillus subtilis
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Author:
Date:
2015-04-05
[Abstract] The eubacterial ribosome (70S) is a macromolecular complex that is composed of a small (30S) subunit and a large (50S) subunit. The small subunit comprises the 16S ribosomal RNA (rRNA) and more than 20 ribosomal proteins (r-proteins), whereas the large subunit comprises the 23S and 5S rRNAs and more than 30 r-proteins. Bacillus subtilis (B. subtilis) has 57 r-ribosomal protein genes and three rRNAs (16S, 23S and 5S rRNAs). Among them, we identified 21 r-proteins of the small subunit and 31 r-proteins of the large subunit in B. subtilis (Nanamiya et al., 2004). The functions and roles of individual components of the ribosome have not yet been completely clarified. Herein we describe in detail an ultracentrifugation-based protocol for the preparation of ...
[摘要] 真细菌核糖体（70S）是由小（30S）亚基和大（50S）亚基组成的大分子复合物。 小亚基包含16S核糖体RNA（rRNA）和超过20个核糖体蛋白（r-蛋白），而大亚基包含23S和5S rRNA和超过30个r蛋白。 枯草芽孢杆菌（<枯草芽孢杆菌）具有57个核糖体蛋白基因和三个rrna（16s，23s和5s rrna）。 其中，我们确定21 r蛋白的小亚基和31 r蛋白的大亚基在b。 枯草芽孢杆菌（nanamiya等人，2004）。 核糖体的各个组分的功能和作用尚未完全澄清。 在本文中，我们详细描述了从b的指数生长细胞制备70s核糖体的基于超速离心的方案。 枯草芽孢杆菌。
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