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Corning® 100 mm TC-treated Culture Dishes

Corning ® 100mm TC处理的培养皿

Company: Corning
Catalog#: 430293
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Fluorophore-Based Mitochondrial Ca2+ Uptake Assay
Author:
Date:
2018-07-20
[Abstract]  The physiological importance of mitochondrial calcium uptake, observed in processes such as ATP production, intracellular calcium signaling, and apoptosis, makes desirable a simple, straightforward way of investigating this event with unambiguous results. The following protocol uses a calcium-sensitive, membrane-impermeable fluorophore to monitor extra-mitochondrial calcium levels in the presence of permeabilized mammalian cells harboring activated mitochondria. [摘要]  在诸如ATP产生,细胞内钙信号传导和细胞凋亡的过程中观察到的线粒体钙摄取的生理学重要性使得以明确的结果研究该事件的简单,直接的方式成为可取的。 以下方案使用钙敏感的膜不可渗透的荧光团来监测在具有活化的线粒体的透化的哺乳动物细胞存在下的线粒体外钙水平。

【背景】线粒体钙单向转运蛋白(MCU)介导的钙通量是钙进入线粒体的主要方式。线粒体钙由于几个原因是重要的,其中三个原因经常在文献中引用。其一,线粒体中的钙激活Krebs循环中的关键脱氢酶,导致ATP产生增加。最近的一项研究表明,线粒体钙对F1FO-ATP酶和细胞色素链活性有直接影响(Glancy和Balaban,2012),进一步增强其在细胞能量产生中的关键作用。二,由于MCU的低微摩尔亲和力和大量细胞溶质钙线粒体可以隔离,MCU介导的钙摄取也在清除细胞质钙的瞬时增加中起关键作用,反过来,形成使用钙的细胞信号通路作为第二信使(Wheeler et al。,2012)。三,线粒体钙的调节在细胞凋亡的调节中起重要作用(Zoratti和Szabo,1995)。线粒体钙水平的急剧增加通过诱导内膜中线粒体通透性转换孔的开放而引发细胞死亡,这一事件消除了线粒体内部膜电位并从膜间隙释放细胞色素C,暗黑/ Smac和半胱氨酸蛋白酶( Zoratti和Szabo,1995; ...

Xenograft Mouse Model of Human Uveal Melanoma
Author:
Date:
2017-11-05
[Abstract]  Uveal melanoma (UM) is a malignant intraocular tumor in adults. Metastasis develops in almost half of the patients and over 90% of the metastases are in the liver. With the advances in molecular targeting therapy for melanoma, a proper metastasis animal model is of increasing importance for testing the accuracy and effectiveness of systemic therapies. Here, we describe a xenograft model for mimicking human UM liver metastasis by injecting human UM cells into the vitreous cavity in nude mice. The athymic nude mice are immunocompromised and suitable for xenograft tumor growth and metastasis, and intravitreal injection of cells is a quicker and easier operation under a binocular scope, thereby it is simple and effective to test human UM growth and metastasis. [摘要]  葡萄膜黑色素瘤(UM)是成人中的恶性眼内肿瘤。 几乎一半的患者发生转移,90%以上的转移灶位于肝脏。 随着分子靶向治疗黑色素瘤的进展,正确的转移动物模型对于检测全身治疗的准确性和有效性越来越重要。 在这里,我们描述了一个模仿人类UM肝转移的异种移植模型,通过将人类UM细胞注入裸鼠的玻璃体腔中。 无胸腺裸鼠具有免疫功能低下,适合异种移植瘤的生长和转移,在双眼镜下,玻璃体内注射细胞更快,更容易手术,因此简单有效地检测人类的UM生长和转移。

【背景】UM是成人中最常见的原发性眼内肿瘤,发病率在世界范围内为5至10个/百万(Singh et al。,2011)。几乎一半的患者在初始诊断即使在治疗或/和移除原发性肿瘤后15年内也发生转移(Kujala等人,2003; Weis等人, 2016)。在超过4%的患者中,诊断时已经存在微转移(Finger等人,2005)。这个数字可能会被低估,因为早期的UM检测的限制。目前的药物治疗,例如眼球摘除术,斑块近距离放疗,质子束照射已经成功地去除或抑制早期的局灶性眼内UMs(Dogrusoz等人,2017)。但是一般来说,UM对标准的化学疗法具有抗性,迄今为止还没有有效的全身治疗可用于转移性病变(Goh和Layton,2016; ...

Analysis of Replicative Intermediates of Adeno-associated Virus through Hirt Extraction and Southern Blotting
Author:
Date:
2017-05-05
[Abstract]  Adeno-associated virus (AAV) is a small single-stranded DNA virus that requires the presence of a helper virus, such as adenovirus or herpes virus, to efficiently replicate its genome. AAV DNA is replicated by a rolling-hairpin mechanism (Ward, 2006), and during replication several DNA intermediates can be detected. This detailed protocol describes how to analyze the AAV DNA intermediates formed during AAV replication using a modified Hirt extract (Hirt, 1967) procedure and Southern blotting (Southern, 1975). [摘要]  腺相关病毒(AAV)是一种小型单链DNA病毒,需要存在辅助病毒,如腺病毒或疱疹病毒,以有效地复制其基因组。 AAV DNA通过滚转发夹机制(Ward,2006)进行复制,并且在复制期间可以检测出几种DNA中间体。该详细方案描述了如何使用改良的Hirt提取物(Hirt,1967)程序和Southern印迹(Southern,1975)分析在AAV复制期间形成的AAV DNA中间体。

背景 AAV DNA复制通过滚动发夹机制在由AAV和辅助病毒如腺病毒或疱疹病毒共感染的细胞中进行(Ward,2006)。 AAV DNA由4.7kb的线性DNA分子和倒置的末端重复(ITR)组成,折叠形成T形发夹结构。 3'末端发夹作为AAV DNA复制的引物。这些发夹结构由AAV Rep蛋白再生,允许进一步复制(Im和Muzyczka,1990)。 AAV DNA的+和 - 链都被包装并且是感染性的(Rose等人,1969)。当分析复制AAV DNA时,可以检测到几种复制中间体(Straus等人,1976)。最丰富的复制中间体是由AAV DNA的一个和一个链形成的线性单体双链体分子,其被认为是将包装在预先形成的衣壳中的后代单链分子的直接前体(Straus ,1976)。二聚体复制中间体也是常见的,AAV复制模型与甚至更大的复制中间体相容。 ...

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