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Dimethyl sulfoxide

二甲基亚砜

Company: Sigma-Aldrich
Catalog#: D4540
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Company-protocol()
Other protocol()

Dual-sided Voltage-sensitive Dye Imaging of Leech Ganglia
Author:
Date:
2018-03-05
[Abstract]  In this protocol, we introduce an effective method for voltage-sensitive dye (VSD) loading and imaging of leech ganglia as used in Tomina and Wagenaar (2017). Dissection and dye loading procedures are the most critical steps toward successful whole-ganglion VSD imaging. The former entails the removal of the sheath that covers neurons in the segmental ganglion of the leech, which is required for successful dye loading. The latter entails gently flowing a new generation VSD, VF2.1(OMe).H, onto both sides of the ganglion simultaneously using a pair of peristaltic pumps. We expect the described techniques to translate broadly to wide-field VSD imaging in other thin and relatively transparent nervous systems. [摘要]  在这个协议中,我们介绍了一种有效的方法,用于Tomina和Wagenaar(2017)中使用的电压敏感染料(VSD)加载和水蛭神经节成像。 解剖和染料加载程序是成功完成全神经节VSD成像的关键步骤。 前者需要去除覆盖水蛭节段神经节神经元的鞘,这是成功染料加载所需的。 后者需要使用一对蠕动泵同时轻柔地将新一代VSD VF2.1(OMe).H流入神经节的两侧。 我们期望所描述的技术广泛地转化为其他薄且相对透明的神经系统中的宽视场VSD成像。

【背景】双面显微镜是一种宽视野荧光成像系统,由一对精确对准的显微镜组成,用于观察来自对面的神经元制剂并且一次显示不同的焦平面(Tomina and Wagenaar,2017)。通过将该光学系统与新一代电压敏感染料(VSD),VoltageFluor(Miller等人,2012; Woodford等人,2015),荧光可以同时从不同深度的神经元捕获编码具有高保真度膜电压的信号。我们将这种泛神经元记录系统应用于药用水蛭的神经系统,我们利用电生理学方法诱发虚构行为并定量控制可识别神经元的膜电位(Tomina and ...

Immunostaining of Formaldehyde-fixed Metaphase Chromosome from Untreated and Aphidicolin-treated DT40 Cells
Author:
Date:
2017-05-05
[Abstract]  During mitosis chromosomes are condensed into dense X-shaped structures that allow for microscopic determination of karyotype as well as inspection of chromosome morphology.

This protocol describes a method to perform immunostaining of formaldehyde-fixed metaphase chromosomes from the avian cell line DT40. It was developed to characterize the localization of YFP-tagged TopBP1 on mitotic chromosomes and specifically determine the percentage of TopBP1 foci that formed on breaks/gaps as well as ends of individual metaphase macrochromosomes (Pedersen et al., 2015). For this purpose immunostaining of YFP was applied. However, the protocol may be optimized for other cell lines or epitopes.
[摘要]  在有丝分裂期间,染色体被浓缩成致密X型结构,允许显微检测染色体核型和检查染色体形态。
该方案描述了从禽细胞系DT40进行甲醛固定的中期染色体的免疫染色的方法。 它被开发用于表征YFP标记的TopBP1在有丝分裂染色体上的定位,并且具体确定形成于断裂/间隙以及单个中期大染色体末端的TopBP1灶的百分比(Pedersen等,2015)。 为此,应用YFP的免疫染色。 然而,该协议可以针对其他细胞系或表位进行优化。
【背景】染色中期染色体的显微镜分析是经典的细胞遗传学技术,广泛用于研究和诊断。基本原理包括通过锭子不稳定试剂如谷氨酸诱导中期细胞周期停滞,这将触发主轴装配检查点,从而阻止细胞在中期。这用于富集浓缩染色体的细胞。随后将细胞在低渗溶液中进行溶胀,然后在显微镜载玻片上铺展有丝分裂细胞。最终结果是来自单细胞的显微镜检测染色体,便于染色体核型分析以及个体染色体的研究。传统上,肿胀的细胞用甲醇和乙酸(3:1)固定,然后铺展在载玻片上(Hungerford,1965; Ronne等,1979)。
这里描述的方法使用甲醛而不是甲醇进行固定。这可以用于随后用与甲醇固定不相容的抗体染色。该方案针对鸡DT40细胞的中期传播进行了优化,YFP标记的TopBP1在中期大染色体上的免疫染色(Pedersen等,2015)。 ...

Measurement of FNR-NrdI Interaction by Microscale Thermophoresis (MST)
Author:
Date:
2017-04-20
[Abstract]  This protocol describes how to measure protein-protein interactions by microscale thermophoresis (MST) using the MonolithTM NT.115 instrument (NanoTemper). We have used the protocol to determine the binding affinities between three different flavodoxin reductases (FNRs) and a flavodoxin-like protein, NrdI, from Bacillus cereus (Lofstad et al., 2016). NrdI is essential in the activation of the manganese-bound form of the class Ib ribonucleotide reductase (RNR) system. RNRs, in turn, are the only source of the de novo synthesis of deoxyribonucleotides required for DNA replication and repair in all living organisms. [摘要]  该协议描述了如何使用Monolith TM NT.115仪器(NanoTemper)通过微量热泳法(MST)测量蛋白质 - 蛋白质相互作用。我们已经使用方案来确定三种不同的黄素氧还蛋白还原酶(FNR)和来自蜡样芽孢杆菌(Lofstad等)的黄素氧还蛋白样蛋白NrdI之间的结合亲和力, 2016)。 NrdI对于Ib类核糖核苷酸还原酶(RNR)系统的锰结合形式的活化至关重要。反过来,RNRs是所有生物体中DNA复制和修复所需的脱氧核糖核苷酸合成的唯一来源。

蛋白质 - 蛋白质的相互作用通常以相关的解离常数(K D )为特征。可以使用诸如等温量热法(ITC),NMR光谱和表面等离子体共振(SPR)的各种技术来建立结合常数。另一种方法是基于热泳法,其中不同分子(例如蛋白质 - 蛋白质复合物与单个蛋白质)对温度梯度的反应不同(Duhr和Braun,2006; Seidel等人, 2013)。该方法快速,不需要样品固定,样品要求较低。简言之,其中一种蛋白质用荧光染料标记并保持在恒定的低浓度。建立稀释系列,其他蛋白质稀释至16倍,产生广泛的浓度范围。随后将两种蛋白质混合并加载到毛细管中,毛细管在Monolith TM ...

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