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Date:
2014-12-20
[Abstract] mRNAs surrounded by polysomes are ready for translation into proteins (Warner et al., 1963); these mRNAs are defined as polysomal-mRNAs (Mustroph et al., 2009). The process is affected by various growth conditions or surrounding situations. Microarray analysis is a powerful tool for detecting genome-wide gene expression. Therefore, using polysomal-mRNAs for microarray analysis can reflect the gene translation information (the translatome) under different developmental stages or environmental conditions from eukaryotes. Polysomal-mRNAs can be collected from the polysomal fraction by sucrose-gradient separation for further quantitative PCR or microarray assay. We modified a protocol (Mustroph et al., 2009) for collecting polysomal-mRNAs via sucrose-gradient ...
[摘要] 由多核糖体包围的mRNA准备好翻译成蛋白质（Warner等人，1963）;这些mRNA被定义为多核糖体mRNA（Mustroph等人，2009）。该过程受到各种生长条件或周围环境的影响。微阵列分析是检测全基因组基因表达的有力工具。因此，使用多核糖体mRNAs微阵列分析可以反映在不同发育阶段或环境条件下从真核生物的基因翻译信息（translatome）。可以通过蔗糖梯度分离从多聚糖部分收集多聚体mRNA，用于进一步的定量PCR或微阵列测定。我们修改了通过蔗糖梯度分离来收集多核糖体mRNA以从pLAT52：HF：RPL18拟南芥中消除单体mRNA污染的方案（Mustroph等人，，2009）。该转基因拟南芥使用花粉特异性启动子（ProLAT52 ）产生可以用特异性抗原纯化的表位标记的多核糖体-RNA复合物（Lin等人，2014 ）。我们通过蔗糖梯度分离和抗体纯化获得的多核糖体mRNA在从拟南芥的自花授粉的芽孢杆菌生长的花粉管中经历了体内翻译。
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