| Split Nano Luciferase-based Assay to Measure Assembly of Japanese Encephalitis Virus
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Author:
Date:
2020-05-05
[Abstract] Cells infected with flavivirus release various forms of infectious and non-infectious particles as products and by-products. Comprehensive profiling of the released particles by density gradient centrifugation is informative for understanding viral particle assembly. However, it is difficult to detect low-abundance minor particles in such analyses. We developed a method for viral particle analysis that integrates a high-sensitivity split luciferase system and density gradient centrifugation. This protocol enables high-resolution profiling of particles produced by cells expressing Japanese encephalitis virus factors.
[摘要] [ 摘要] 黄病毒感染的细胞释放出各种形式的传染性和非传染性颗粒，分别作为产物和副产物。通过密度梯度离心对释放的颗粒进行全面分析，有助于理解病毒颗粒的组装，但是很难检测到低水平的病毒颗粒。我们开发了一种将高灵敏度分裂荧光素酶系统和密度梯度离心相结合的病毒颗粒分析方法，该协议可对表达日本脑炎病毒因子的细胞产生的颗粒进行高分辨率分析。
[ 背景 ] 黄病毒是包括病毒，登革热病毒，西尼罗河病毒，tick传脑炎病毒，寨卡病毒，黄热病病毒和日本脑炎病毒（JEV）在内的一组虫媒病毒，与人类的大量发病和死亡相关（ Chambers 等人，1990）。黄病毒具有编码长多肽的单个ORF基因组，该ORF基因组在翻译后被切割成三个结构性（C，prM 和E）和七个非结构性（NS1，NS2A，NS2B，NS3，NS4A）。 ，NS4B和NS5）蛋白通过宿主信号肽酶和NS2B-NS3病毒蛋白酶（Chambers 等，1990）。
由NS5 RNA依赖的RNA聚合酶合成的病毒基因组RNA与C蛋白结合形成核衣壳，然后将其包装在由宿主细胞衍生的脂质膜，病毒prM 和E跨膜蛋白组成的包膜中以形成病毒体。已经发现，缺乏所有结构基因的还原型黄病毒基因组RNA被称为亚基因组复制子，可以在宿主细胞中自我复制（Suzuki ...
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| Polysomal-mRNA Extraction from Arabidopsis by Sucrose-gradient Separation
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Author:
Date:
2014-12-20
[Abstract] mRNAs surrounded by polysomes are ready for translation into proteins (Warner et al., 1963); these mRNAs are defined as polysomal-mRNAs (Mustroph et al., 2009). The process is affected by various growth conditions or surrounding situations. Microarray analysis is a powerful tool for detecting genome-wide gene expression. Therefore, using polysomal-mRNAs for microarray analysis can reflect the gene translation information (the translatome) under different developmental stages or environmental conditions from eukaryotes. Polysomal-mRNAs can be collected from the polysomal fraction by sucrose-gradient separation for further quantitative PCR or microarray assay. We modified a protocol (Mustroph et al., 2009) for collecting polysomal-mRNAs via sucrose-gradient ...
[摘要] 由多核糖体包围的mRNA准备好翻译成蛋白质（Warner等人，1963）;这些mRNA被定义为多核糖体mRNA（Mustroph等人，2009）。该过程受到各种生长条件或周围环境的影响。微阵列分析是检测全基因组基因表达的有力工具。因此，使用多核糖体mRNAs微阵列分析可以反映在不同发育阶段或环境条件下从真核生物的基因翻译信息（translatome）。可以通过蔗糖梯度分离从多聚糖部分收集多聚体mRNA，用于进一步的定量PCR或微阵列测定。我们修改了通过蔗糖梯度分离来收集多核糖体mRNA以从pLAT52：HF：RPL18拟南芥中消除单体mRNA污染的方案（Mustroph等人，，2009）。该转基因拟南芥使用花粉特异性启动子（ProLAT52 ）产生可以用特异性抗原纯化的表位标记的多核糖体-RNA复合物（Lin等人，2014 ）。我们通过蔗糖梯度分离和抗体纯化获得的多核糖体mRNA在从拟南芥的自花授粉的芽孢杆菌生长的花粉管中经历了体内翻译。
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