| Murine Monocyte and Macrophage Culture
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Author:
Date:
2021-03-20
[Abstract] Myeloid progenitors in the bone marrow generate monocytes, macrophages, granulocytes and most dendritic cells. Even though these innate immune cells are part of the same lineage, each cell type plays a specific and critical role in tissue development, host defense and the generation of adaptive immunity. Protocols have been developed in the past to differentiate myeloid cell types from bone marrow cells, enabling functional investigation and furthering our understanding about their contribution to mammalian physiology. In this protocol, we describe a simple and rapid method to isolate monocytes from murine bone marrow, culture them for up to 5 days and lastly, differentiate them into bone marrow derived macrophages (Figure 1).
Graphic abstract: ...
[摘要] [摘要]骨髓中的骨髓祖细胞产生单核细胞，巨噬细胞，粒细胞和大多数树突状细胞。即使这些先天免疫细胞是同一谱系的一部分，每种细胞类型在组织发育，宿主防御和适应性免疫的产生中也发挥着特定而关键的作用。过去已经开发出区分骨髓细胞和骨髓细胞的协议，以进行功能研究并加深我们对它们对哺乳动物生理学贡献的理解。在该协议中，我们描述了一种简单快速的方法，可从鼠骨髓中分离单核细胞，将其培养长达5天，最后，将它们分化为源自骨髓的巨噬细胞（图1）。
图形摘要：
图1.实验概述，描绘了鼠单核细胞和巨噬细胞培养的步骤
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| Flow Cytometric Quantification of Fatty Acid Uptake by Mycobacterium tuberculosis in Macrophages
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Author:
Date:
2018-02-20
[Abstract] Mycobacterium tuberculosis (Mtb) has evolved to assimilate fatty acids from its host. However, until recently, there was no reliable way to quantify fatty acid uptake by the bacteria during host cell infection. Here we describe a new method to quantify fatty acid uptake by intracellular bacilli. We infect macrophages with Mtb constitutively expressing mCherry and then metabolically label them with Bodipy-palmitate. Following the labeling procedure, we isolate Mtb-containing phagosomes on a sucrose cushion and disrupt the phagosomes with detergent. After extensive washes, the isolated bacteria are analyzed by flow cytometry to determine the level of Bodipy-palmitate signal associated with the bacteria. Using a Mtb mutant strain defective in fatty acid uptake in liquid culture we ...
[摘要] 结核分枝杆菌（Mtb）已经发展为从其宿主吸收脂肪酸。然而，直到最近，还没有可靠的方法来量化宿主细胞感染期间细菌对脂肪酸的摄取。在这里，我们描述了一种新的方法来量化细胞内杆菌对脂肪酸的摄取。我们用Mtb组成性表达mCherry感染巨噬细胞，然后用Bodipy-palmitate代谢标记它们。标记程序后，我们在蔗糖垫上分离含有Mtb的吞噬体，并用去污剂破坏吞噬体。大量洗涤后，通过流式细胞术分析分离的细菌以确定与细菌相关的Bodipy-棕榈酸酯信号的水平。使用液体培养物中脂肪酸摄取缺陷的Mtb突变株，我们确定该突变体在巨噬细胞感染期间同化比野生型菌株少10倍的Bodipy-棕榈酸酯。脂肪酸摄取的这种定量方法可用于进一步鉴定参与细胞内Mtb和可能的其他细菌的脂质摄取的途径。
【背景】结核分枝杆菌（Mtb）同化宿主来源的脂质（脂肪酸和胆固醇）的能力使得病原体能够在其宿主内存活（Russell等人，2010; Lovewell 等人，2016）。在小鼠感染期间和在人肺组织中，通过巨噬细胞内的Mtb上调胆固醇和脂肪酸代谢相关基因来支持该想法（Schnappinger等人，2003; Rachman等人，2006; Rohde等人，2007;Fontán等人，2008; Tailleux等人，2008; Homolka et al。，2010; Rohde et ...
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| Polyamine and Paraquat Transport Assays in Arabidopsis Seedling and Callus
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Author:
Date:
2017-08-05
[Abstract] Polyamines (PAs) are polycationic compounds found in all living organisms and play crucial roles in growth and survival. We here show the ‘Polyamine and paraquat (PQ) transport assay’ protocol, which can be used to examine the uptake activity of PA/PQ transporters. We have used this protocol to demonstrate that PUT3 in Arabidopsis is a polyamine transporter and is able to take up spermidine and its analog paraquat.
[摘要] 多胺（PA）是在所有生物体中发现的聚阳离子化合物，在生长和生存中起关键作用。 我们在这里展示了“多胺和百草枯（PQ）运输测定”方案，可用于检查PA / PQ转运蛋白的摄取活性。 我们已经使用该协议来证明拟南芥中的PUT3是多胺转运蛋白，并且能够吸收亚精胺及其类似百草枯。
【背景】PA通过与阴离子大分子如DNA，RNA和蛋白质的功能相互作用和调节而参与基因调控。 在活细胞中，必须调节PA的含量以维持细胞止血。 在高等植物中，三种主要的多胺，腐胺（Put），亚精胺（Spd）和精胺（Spm）以游离形式或缀合形式与其他分子一起存在（Gill和Tuteja，2010）。 在酵母中，鉴定了四种质膜多胺转运体DUR3，SAM3，GAP1和AGP2（Uemura等人，2007）。 在拟南芥中，鉴定了5种推定的多胺摄取转运蛋白（PUT1-PUT5），并且PUT1-3已被实验验证为多胺转运蛋白（Mulangi等人，2012; Li et al，2013）。 我们以下所述的方案成功证实了PUT3是多胺和百草枯的流入转运蛋白，并且在Put3突变体（Shen等人，2016）中PQ /Spd吸收受损）。
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