| Induction of Natural Competence in Genetically-modified Lactococcus lactis
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Author:
Date:
2018-07-05
[Abstract] Natural competence can be activated in Lactoccocus lactis subsp lactis and cremoris upon overexpression of ComX, a master regulator of bacterial competence. Herein, we demonstrate a method to activate bacterial competence by regulating the expression of the comX gene by using a nisin-inducible promoter in an L. lactis strain harboring either a chromosomal or plasmid-encoded copy of nisRK. Addition of moderate concentrations of the inducer nisin resulted in concomitant moderate levels of ComX, which led to an optimal transformation rate (1.0 x 10-6 transformants/total cell number/g plasmid DNA). Here, a detailed description of the optimized protocol for competence induction is presented.
[摘要] 在过度表达细菌能力的主要调节因子ComX后，天然能力可以在乳酸乳球菌亚种乳酸和 cremoris 中激活。 在本文中，我们展示了通过在 L中使用乳链菌肽诱导型启动子调节 comX 基因的表达来激活细菌能力的方法。 含有 nisRK 的染色体或质粒编码拷贝的lactis 菌株。 加入中等浓度的诱导剂乳链菌肽导致伴随的中等水平的ComX，其导致最佳转化率（1.0×10 2 sup / -6>转化子/总细胞数/ g质粒DNA）。 在此，提出了用于能力归纳的优化协议的详细描述。
【背景】自然能力是细菌通过专门的摄取机制获得外源DNA的过程，之后内化的DNA整合到其基因组中或作为质粒DNA维持。一些细菌在特定的环境触发因素如基因毒性应激或饥饿时进入能力状态（Seitz和Blokesch，2013; Blokesch，2016）。群体感应系统，如 comCDE 或 comRS ，控制着革兰氏阳性菌的自然能力的激活（Håvarstein et al。，1995; Pestova et al。，1996; Kleerebezem et al。，1997b; Fontaine et al。，2015）。更具体地说， comC 和 comS 编码信息素，而 comD 编码组氨酸激酶和 comE 和 comR 编码响应调节器（Håvarstein et al。，1995; ...
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| Determination of NO and CSF Levels Produced by Bacillus subtilis
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Author:
Date:
2017-07-05
[Abstract] The cell-to-cell communication and division of labour that occurs inside a beneficial biofilm produce significant differences in gene expression compared with the gene expression pattern of cells grew under planktonic conditions. In this sense, the levels of NO (nitric oxide) and CSF (Competence Sporulation Stimulating Factor) produced in Bacillus subtilis cultures have been measured only under planktonic growth conditions. We sought to determine whether NO and/or CSF production is affected in B. subtilis cells that develop as a biofilm. To measure the production levels of the two prolongevity molecules, we grew B. subtilis cells under planktonic and biofilm supporting condition.
[摘要] 与浮游生物条件下生长的细胞的基因表达模式相比，有益生物膜内发生的细胞间细胞通讯和分裂产生显着的基因表达差异。 在这个意义上，仅在浮游生长条件下测量枯草芽孢杆菌培养物中产生的NO（一氧化氮）和CSF（能力孢子刺激因子）的水平。 我们试图确定是否NO和/或CSF生产受到影响。 枯草芽孢杆菌细胞作为生物膜发展。 为了测量两种长寿命分子的生产水平，我们生长了B。 枯草芽孢杆菌细胞在浮游生物膜支持条件下。
【背景】NO是关键的信号分子，在脊椎动物的各种生物过程中发挥作用（Kerwin等人，1995）。 ℃。 elegans 不能产生自己的NO，但是能够包含由B生产的NO。 （Cabreiro and Gems，2013; Gusarov et al。，2013; Kim，2013; Clark和Hodgkin，2014）。大多数生物体在通过由基因编码的酶NO合成酶催化的反应中，通过L-精氨酸向L-瓜氨酸的有氧转化而产生NO（Sudhamsu和Crane，2009）。 电子。 （OP50，HB101）（Cabreiro和Gems，2013; Kim，2013; Clark和Hodgkin，2014），其中几种常规用于喂食蠕虫（OP50，HB101），因为缺乏有氧NO生产，不太熟练功能副本 nos （Sudhamsu and ...
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| Halo Assay for Toxic Peptides and Other Compounds in Microorganisms
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Author:
Date:
2016-11-20
[Abstract] We describe an assay for determination of toxicity in S. cerevisiae involving spotting of a toxic peptide on a lawn of yeast cells. This assay may be generalized to determine toxicity of a variety of compounds by substituting a putative toxic compound in place of the peptide. The general protocol may also be used to determine toxicity of any small compound toward another microorganism by replacing S. cerevisiae with the target microbe and modifying growth conditions accordingly.
[摘要] 我们描述了用于测定S中的毒性的测定法。酿酒酵母包括在酵母细胞的菌苔上发现毒性肽。该测定法可以概括为通过用推定的毒性化合物代替肽来测定多种化合物的毒性。一般方案还可以用于通过替换S来确定任何小的化合物对另一种微生物的毒性。酿酒酵母与目标微生物并相应地改变生长条件。
[背景] 二肽/三肽是所有生物体氮，碳和氨基酸的主要来源之一。含有毒性氨基酸残基的合成肽提供了测定酿酒酵母中肽转运和/或利用的实验方法。通过细胞内肽酶或蛋白酶水解内化肽释放毒性残留物，导致在培养皿中铺板的细胞培养板上生长停滞的容易检测的区域（晕轮）。例如，在细胞内水解时，毒性肽Ala-Eth释放乙硫氨酸（Eth），甲硫氨酸拮抗剂干扰氨基酸掺入蛋白质中以及DNA和其它甲基化途径的正常甲基化，从而导致细胞死亡。当点样到酵母细胞的草坪上时，转运的二肽Ala-Eth将抑制生长，并且在含有Eth的有毒肽被点样的区域周围的细胞的细胞壁中形成清晰的"晕"（图1A）。本文描述的用于测定肽中毒性的测定。 （1）可以通过简单地使用推定的有毒化合物代替含有毒性氨基酸的肽来修饰以确定任何底物的毒性，或者（2）其可以被修饰以通过替换S来确定底物对任何微生物的毒性。酿酒酵母在用靶生物的测定中。它是一种简单，廉价和相对快速的方法，用于确定针对特定生物体和所测定的毒性部分修改的底物毒性。
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