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Company: Miltenyi Biotec
Catalog#: 130-042-401
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Primary Cultures from Human GH-secreting or Clinically Non-functioning Pituitary Adenomas
Author:
Date:
2018-04-05
[Abstract]  Pituitary adenomas are among the more frequent intracranial tumors usually treated with both surgical and pharmacological–based on somatostatin and dopamine agonists–approaches. Although mostly benign tumors, the occurrence of invasive behaviors is often detected resulting in poorer prognosis. The use of primary cultures from human pituitary adenomas represented a significant advancement in the knowledge of the mechanisms of their development and in the definition of the determinants of their pharmacological sensitivity. Moreover, recent studies identified also in pituitary adenomas putative tumor stem cells representing, according to the current hypothesis, the real cellular targets to eradicate most malignancies. In this protocol, we describe the procedure to establish primary cultures ... [摘要]  垂体腺瘤是更常见的颅内肿瘤之一,通常用基于生长抑素和多巴胺激动剂手术的手术和药物治疗。 虽然多为良性肿瘤,但侵入性行为的发生常常被检测到,导致预后较差。 来自人类垂体腺瘤的原代培养物的使用代表了对其发育机制的知识以及其药理敏感性决定因素的定义方面的显着进步。 此外,最近的研究也在垂体腺瘤中发现了假定的肿瘤干细胞,根据目前的假设,它代表了根除大多数恶性肿瘤的真实细胞靶标。 在这个协议中,我们描述了从人垂体腺瘤建立原代培养的程序,以及如何选择,体外扩增和表型鉴定推定的垂体腺瘤干细胞。

【背景】垂体腺瘤是最常见的颅内肿瘤之一(高达15%),横断面研究发现每100,000名居民中约有90例发病,其中绝大多数为30岁以上的成年人。大约10%的未经选择的垂体在尸检时进行了检查(即考虑到之前未诊断为垂体疾病的受试者的垂体)( ,Molitch,2017)。尽管通常为良性肿瘤,但垂体腺瘤的处理可因与激素分泌过多相关的临床综合征或发展以治疗抗性,高增殖率,快速复发和绒毛外侵袭为特征的侵袭行为而复杂化(Carreno等人,2017)。成年垂体干细胞的持续存在(Florio,2011)导致垂体腺瘤(以及可能的其他良性瘤形成)的发展可以源自具有干细胞特性(主要是自我更新和分化)的肿瘤细胞的亚群能力),正如已经建立的恶性固体和血液肿瘤一样。

最近的实验证据表明,癌症干细胞(CSC)范例也适用于人和小鼠垂体腺瘤(Donangelo等人,2014; ...

Intravenous Labeling and Analysis of the Content of Thymic Perivascular Spaces
Author:
Date:
2018-03-05
[Abstract]  Following development in the thymus, T cells are thought to exit into the periphery predominantly through perivascular spaces (PVS). This exit route is used by conventional T cells, and likely also applies to unconventional T cell subsets, such as precursors of CD8αα and TCRγδ intraepithelial lymphocytes, regulatory T cells and natural killer T cells. Additional cell types might also be found in the PVS and initiate interactions with exiting T cells. The exact content of the PVS, and the processes within, are not well studied. To distinguish vascular from resident cells within various tissues by flow cytometry, intravenous (i.v.) labeling is becoming a commonly employed method. We recently used anti-CD45.2 antibodies and magnetic enrichment to further evaluate this technique, and compared ... [摘要]  在胸腺发育后,T细胞被认为主要通过血管周围间隙(PVS)进入周边。 这种退路由常规T细胞使用,也可能适用于非常规T细胞亚群,例如CD8αα和TCRγδ上皮内淋巴细胞的前体,调节性T细胞和天然杀伤T细胞。 其他细胞类型也可能在PVS中发现并启动与退出T细胞的相互作用。 PVS的确切内容及其内部过程尚未得到充分研究。 为了通过流式细胞术将血管与各种组织中的驻留细胞区分开,静脉内(静脉内)标记正在成为常用方法。 我们最近使用抗CD45.2抗体和磁性富集来进一步评估这种技术,并比较胸腺和血液中的标记和未标记的细胞。 该测定可用于特异性研究胸腺PVS内的造血细胞亚群。

【背景】未成熟的胸腺细胞经历一系列成熟步骤,包括正向和负向选择,其消除了大部分发育中的T细胞。由此产生的成熟T细胞库因此形成朝向更高比例的有益克隆和减少比例的危险自反应克隆。胸腺还产生较少丰富的T细胞亚群,其通常用于维持免疫系统,组织和代谢稳态,包括:TCRγδ细胞,调节性T细胞(Treg),自然杀伤T细胞(NKT),上皮内淋巴细胞(IEL)和粘膜相关不变T(MAIT)细胞。成熟的胸腺细胞准备迁移到外周,上调表达识别鞘氨醇-1磷酸(S1P)的受体(S1PR1)的表达,S1P是血液中高浓度存在的脂质分子。 S1PR1 + T细胞沿着S1P梯度迁移并卷入血管循环中。

胸腺血管周围间隙(PVS)是实质和脉管系统之间的基膜分隔室。它们被认为促进了细胞的运输,特别是从胸腺移出的成熟T细胞(Mori等人,2007; ...

Differentiation of Myeloid-derived Suppressor Cells from Murine Bone Marrow and Their Co-culture with Splenic Dendritic Cells
Author:
Date:
2017-09-20
[Abstract]  Myeloid-derived suppressor cells (MDSCs) possess the ability to suppress the immune response, and to amplify the regulatory properties of other immune cells, i.e., dendritic cells. Here we describe a protocol in which MDSCs were differentiated from murine bone marrow cells, and CD11c+ dendritic cells were purified from murine spleens. MDSCs and CD11c dendritic cells can be co-cultured and the immunoregulatory phenotype of the MDSCs-conditioned dendritic cells could be assessed by means of a specific functional in vivo experiment, i.e., a skin test as a measure of the delayed-type hypersensitivity reaction toward a poorly immunogenic antigen. [摘要]  骨髓来源的抑制细胞(MDSCs)具有抑制免疫应答的能力,并扩增其他免疫细胞即树突状细胞的调节特性。 在这里,我们描述了MDSC与鼠骨髓细胞分化的方案,并且从鼠脾中纯化CD11c +树突状细胞。 可以共培养MDSC和CD11c树突状细胞,并且可以通过特定的功能体内实验来评估MDSCs条件树突细胞的免疫调节表型,即皮肤试验作为延迟型超敏反应的量度 抗免疫原性较差的抗原。
【背景】骨髓来源的抑制细胞(MDSCs)是由早期分化阶段的巨噬细胞,粒细胞,树突状细胞和骨髓细胞的前体组成的骨髓细胞组(Youn等人,2008),其在肿瘤的淋巴组织中大量积累感染性小鼠以及感染性疾病,败血症和创伤的小鼠。这些细胞的主要特征是它们以Ag特异性和/或非特异性方式抑制T细胞应答的能力。这些细胞现在被认为是负责肿瘤相关免疫缺陷的主要细胞类型之一;涉及MDSC介导的免疫抑制的主要因素包括Arg1的高表达(Marvel和Gabrilovich,2015)。精氨酸酶1(Arg1)和吲哚胺2,3-双加氧酶1(IDO1)分别是催化L-精氨酸(L-Arg)和L-色氨酸(L-Trp)降解的免疫调节酶,导致局部氨基酸剥夺。此外,与Arg1不同,IDO1在树突细胞(DC)中也具有非酶信号传导活性(Mondanelli等,2017)。除了其固有的免疫抑制活性外,MDSC还可能扩增其他免疫细胞的调节特性,特别是在肿瘤微环境中。虽然建立了MDSC-巨噬细胞相互作用的一些机制(Ugel等,2015),MDSCs和DCs之间的串扰仍然不清楚(Ostrand-Rosenberg等,2012);为弥补这一差距,我们已经制定了该方案,并且我们证明了Arg1 ...

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