| Lentiviral Barcode Labeling and Transplantation of Fetal Liver Hematopoietic Stem and Progenitor Cells
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Author:
Date:
2017-04-20
[Abstract] Cellular barcoding enables the dissection of clonal dynamics in heterogeneous cell populations through single cell lineage tracing. The labeling of hematopoietic stem and progenitor cells (HSPCs) with unique and heritable DNA barcodes, makes it possible to resolve donor cell heterogeneity in terms of differentiation potential and lineage bias at the single cell level, through subsequent transplantation and high-throughput sequencing. Furthermore, cellular barcoding allows for bona fide hematopoietic stem cells (HSCs) to be defined based on functional rather than immunophenotypic parameters.
This protocol describes the work flow of lentiviral cellular barcoding, tracking 14.5 days post coitum (d.p.c.) fetal liver (FL) Lineage-Sca+cKit+ (LSK) HSPCs following ...
[摘要] 细胞条形码可以通过单细胞谱系追踪来分离异种细胞群体中的克隆动力学。通过独特和可遗传的DNA条形码对造血干细胞和祖细胞（HSPC）进行标记，可以通过随后的移植和高通量测序，在单细胞水平上分化供体细胞异质性，分化潜力和谱系偏倚。此外，细胞条形码可以根据功能而不是免疫表型参数定义真正的造血干细胞（HSC）。
＆nbsp;该协议描述了慢病毒细胞条形码的工作流程，追踪1450天后（dpc）胎肝（FL）Lineage-Sca+ cKit + （LSK）HSPC经过长期重建（图1）（Kristiansen等人，2016），但可以适应于选择的细胞类型或时间框架。
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图1.实验工作流程摘要（Naik 等人，2013）
最初建立了细胞条形码技术来解决在体内移植造血细胞后的单细胞动力学，并且近年来在移植中对血细胞群体中功能异质性的认识有显着贡献（Schepers ，2008; Gerrits等人，2010; Lu等人，2011; Naik等人 ，2013; Verovskaya等人，2013; ...
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| Plant Tissue Trypan Blue Staining During Phytopathogen Infection
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Author:
Date:
2016-12-20
[Abstract] In this protocol plant tissue is stained with trypan blue dye allowing the researcher to visualize cell death. Specifically this method avoids the use of the carcinogen compound chloral hydrate, making this classical method of staining safer and faster than ever. The protocol is applied specifically to detect cell death on Arabidopsis leaves during the course of infection with necrotrophic fungus Botrytis cinerea.
[摘要] 在该方案中，植物组织用台盼蓝染料染色，使研究人员可视化细胞死亡。具体来说，这种方法避免了使用致癌物水合氯醛，使得这种经典染色方法的染色比以往更加安全和快速。该方案专门用于在坏死性真菌Botrytis cinerea感染过程中检测拟南芥叶片上的细胞死亡。
【背景】 检测死植物组织的最常见的方法之一是台盼蓝染色（Keogh等人，1980）。该重氮染料也用于组织学和药物中，以通过允许细胞死亡的观察来测量组织存活力（Keogh等人，1980; Cooksey，2014）。涉及台盼蓝染色的大多数微观方法需要长时间的清除步骤，使用水合氯醛（CHL），一种目前使用的小型有机化合物，如实验动物中的致癌物，麻醉剂和止痛剂（Keogh等， 1980年; Lu和Greco，2006; Salmon等人，1995）。 CHL未经美国FDA批准或欧盟EMA在任何医疗指征（ http://www.accessdata.fda.gov/ ）。只有250mg或50mg的合唱水合物足以分别产生成人或儿科镇静剂，其毒性也在新生儿中测定（ http://www.drugs.com ...
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| Cryopreservation Protocol for Chlamydomonas reinhardtii
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Author:
Date:
2016-11-20
[Abstract] Cryopreservation is commonly used for storing viable cells, tissues, organs or organisms at ultralow temperatures, and usually involves immersion in liquid nitrogen at -196 °C. Here we provide a detailed cryopreservation protocol for C. reinhardtii based on Crutchfield’s work (Crutchfield et al., 1999), with minor changes (Yang and Li, 2016). In this study, we compared the cryoprotection effect of two common cryopreservation agents (CPAs), methanol and DMSO. Furthermore, the two-step cryopreservation process was divided into five stages to study the factors affecting the survival rate at each stage. We found that the use of methanol as the CPA, combined with the cooling process outlined here (cooling from 25 °C to -55 °C at a rate of 1 °C/min), were indispensable for ...
[摘要] 冷冻保存通常用于在超低温度下储存活细胞，组织，器官或生物体，并且通常包括在-196℃的液氮中浸泡。在这里，我们提供了一个详细的cryopreservation协议。基于Crutchfield的工作（Crutchfield et al 。，1999），并进行微小的改变（Yang和Li，2016）。在这项研究中，我们比较了两种普通冷冻保存剂（CPAs），甲醇和DMSO的冷冻保护作用。此外，两步冷冻保存过程分为五个阶段，以研究影响每个阶段的生存率的因素。我们发现使用甲醇作为CPA，结合此处概述的冷却过程（以1℃/min的速率从25℃冷却至-55℃）对于冷冻保存后的细胞存活是不可缺少的。这里描述的解冻过程（在35℃解冻5分钟）对于提高存活率也是重要的。
[背景] 现在，冷冻保存经常用于储存C的转基因品系或突变系。以及涉及该生物体的实验需要。 Morris等人。 （1979）讨论了不同CPA在冷却中的影响，温度和存活率之间的关系，有或没有CPA，和冷却速度。他们发现，加入甲醇后，半致死温度是测试的所有CPA中最低的（-14.4℃），而DMSO的温度为-4.9℃（Morris等人， 1979）。
通过在室温下在7％（v/v）DMSO中储存过夜，随后在-70℃下储存，Johnson和Dutcher（1993）获得了最高的活力，在10℃下接近10％。莱茵哈德文化。然而，存活率可以在C中被限制。特别是在我们使用的细胞系CC-125中，尽管作者的主张是由液体培养引起的，但存活率仅为0.34％。然而，该方法是耗时的并且导致低的细胞存活力。 ...
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