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Biotin

生物素

Company: Sigma-Aldrich
Catalog#: B4501
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Transcytosis Assay for Transport of Glycosphingolipids across MDCK-II Cells
Author:
Date:
2018-10-20
[Abstract]  Absorption and secretion of peptide and protein cargoes across single-cell thick mucosal and endothelial barriers occurs by active endocytic and vesicular trafficking that connects one side of the epithelial or endothelial cell (the lumen) with the other (the serosa or blood). Assays that assess this pathway must robustly control for non-specific and passive solute flux through weak or damaged intercellular junctions that seal the epithelial or endothelial cells together. Here we describe an in vitro cell culture Transwell assay for transcytosis of therapeutic peptides linked covalently to various species of the glycosphingolipid GM1. We recently used this assay to develop technology that harnesses endogenous mechanism of lipid sorting across epithelial cell barriers to enable ... [摘要]  单细胞厚粘膜和内皮屏障上的肽和蛋白质货物的吸收和分泌通过活性内吞和囊泡运输发生,其连接上皮细胞或内皮细胞(管腔)的一侧与另一侧(浆膜或血液)。 评估该途径的测定必须通过弱的或受损的细胞间连接强有力地控制非特异性和被动的溶质通量,所述细胞间连接将上皮细胞或内皮细胞密封在一起。 在这里,我们描述了一种体外>细胞培养Transwell测定法,用于与各种鞘糖脂GM1共价连接的治疗性肽的转胞吞作用。 我们最近使用该测定开发了技术,该技术利用跨上皮细胞屏障的脂质分选的内源机制,以实现肽和蛋白质治疗剂的口服递送。

【背景】
大分子穿过覆盖粘膜表面的单细胞厚的上皮屏障和衬在供给心肌和脑的血管的紧密内皮屏障上的运输通过内吞过程发生,该内吞过程将这些极化细胞的一侧与另一侧连接。该过程称为转胞吞作用(Garcia-Castillo et al。>,2017)。通过受体介导的内吞作用和穿过消化道和呼吸道粘膜的囊泡运输的免疫球蛋白的吸收和分泌最着名的是这一过程。对转胞吞作用的兴趣也受到利用该途径在紧密上皮和内皮屏障上递送治疗性肽和蛋白质的潜力的刺激(Thuenauer 等人,>,2017)。

转胞吞作用是一种活跃的(ATP驱动的)过程。在一些情况下,通过细胞间紧密连接在细胞周围被动扩散可以发生大分子跨越紧密上皮和内皮屏障的转运(Fung ...

Induction of Natural Competence in Genetically-modified Lactococcus lactis
Author:
Date:
2018-07-05
[Abstract]  Natural competence can be activated in Lactoccocus lactis subsp lactis and cremoris upon overexpression of ComX, a master regulator of bacterial competence. Herein, we demonstrate a method to activate bacterial competence by regulating the expression of the comX gene by using a nisin-inducible promoter in an L. lactis strain harboring either a chromosomal or plasmid-encoded copy of nisRK. Addition of moderate concentrations of the inducer nisin resulted in concomitant moderate levels of ComX, which led to an optimal transformation rate (1.0 x 10-6 transformants/total cell number/g plasmid DNA). Here, a detailed description of the optimized protocol for competence induction is presented. [摘要]  在过度表达细菌能力的主要调节因子ComX后,天然能力可以在乳酸乳球菌亚种乳酸和 cremoris 中激活。 在本文中,我们展示了通过在 L中使用乳链菌肽诱导型启动子调节 comX 基因的表达来激活细菌能力的方法。 含有 nisRK 的染色体或质粒编码拷贝的lactis 菌株。 加入中等浓度的诱导剂乳链菌肽导致伴随的中等水平的ComX,其导致最佳转化率(1.0×10 2 sup / -6>转化子/总细胞数/ g质粒DNA)。 在此,提出了用于能力归纳的优化协议的详细描述。

【背景】自然能力是细菌通过专门的摄取机制获得外源DNA的过程,之后内化的DNA整合到其基因组中或作为质粒DNA维持。一些细菌在特定的环境触发因素如基因毒性应激或饥饿时进入能力状态(Seitz和Blokesch,2013; Blokesch,2016)。群体感应系统,如 comCDE 或 comRS ,控制着革兰氏阳性菌的自然能力的激活(Håvarstein et al。,1995; Pestova et al。,1996; Kleerebezem et al。,1997b; Fontaine et al。,2015)。更具体地说, comC 和 comS 编码信息素,而 comD 编码组氨酸激酶和 comE 和 comR 编码响应调节器(Håvarstein et al。,1995; ...

Dual-probe RNA FRET-FISH in Yeast
Author:
Date:
2018-06-05
[Abstract]  mRNA Fluorescence In Situ Hybridization (FISH) is a technique commonly used to profile the distribution of transcripts in cells. When combined with the common single molecule technique Fluorescence Resonance Energy Transfer (FRET), FISH can also be used to profile the co-expression of nearby sequences in the transcript to measure processes such as alternate initiation or splicing variation of the transcript. Unlike in a conventional FISH method using multiple probes to target a single transcript, FRET is limited to the use of two probes labeled with matched dyes and requires the use of sensitized emission. Any widefield microscope capable of sensitive single molecule detection of Cy3 and Cy5 should be able to measure FRET in yeast cells. Alternatively, a FRET-FISH method can be ... [摘要]  mRNA荧光原位杂交(FISH)是一种常用于分析细胞中转录物分布的技术。 当与常见的单分子技术荧光共振能量转移(FRET)相结合时,FISH也可用于分析转录本中附近序列的共表达以测量转录本的替代启动或剪接变异等过程。 与使用多个探针靶向单个转录物的常规FISH方法不同,FRET限于使用用匹配染料标记的两个探针,并且需要使用敏化发射。 任何能够灵敏地检测Cy3和Cy5单分子的宽视场显微镜应该能够测量酵母细胞中的FRET。 或者,可以使用FRET-FISH方法明确确定转录本的身份,而不使用其他FISH技术中使用的引导探针组。

【背景】单细胞转录物分布的定量通常通过用多个探针靶向mRNA来实现,以实现可以与非特异性结合的探针区分开的明亮信号(Raj和Tyagi,2010)。但是,在某些情况下,转录本上有特征,例如剪接变体或替代起始位点,这与常规FISH探针组无法区分。这些同种型序列可以具有短的50nt唯一识别序列。使用两种探针,可以使用FRET对定位结合的任一侧,同时定量多达三种mRNA同种型,例如,具有两种探针的同种型(FRET),具有探针1的同种型仅限于探针2的同种型。依赖于单个荧光团或荧光团对需要通过EMCCD进行灵敏检测。而且,可以使用FRET对(Wadsworth等人,2017)来估计没有其他同种型的序列的探针的检测效率。

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