| Isolation of Extracellular Vesicles Derived from Mesenchymal Stromal Cells by Ultracentrifugation
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Author:
Date:
2020-12-20
[Abstract] Extracellular vesicles (EVs) are a heterogeneous group of membranous vesicles that differ on their biogenesis and release pathways, such as exosomes, microvesicles and apoptotic bodies. They are involved in cell-to-cell communication delivering signal molecules (proteins, nucleic acids, lipids, etc.) that can regulate different physiological processes, as well as the development and progression of several diseases. There are different methods and commercial kits to isolate EVs and depending on the methodology one could obtain EVs with different degrees of efficiency, purity and it can be more or less time-consuming. Then, the choice has to be according to the different advantages and disadvantages, and their use for downstream applications. Here, we describe the EVs isolation ...
[摘要] [摘要]细胞外囊泡（EV多个），关于它们的生物合成和释放途径不同膜囊泡的一组异质小号，诸如外来体，微泡和凋亡小体。它们参与细胞间传递信号的信号分子（蛋白质，核酸，脂质等），这些信号分子可调节不同的生理过程以及几种疾病的发生和发展。分离电动汽车有不同的方法和商业工具包，根据方法学的不同，人们可以获得具有不同程度的效率，纯度的电动汽车，这或多或少会耗时。然后，必须根据不同的优缺点及其在下游应用中的用途进行选择。在这里，我们描述了通过超速离心从间充质基质细胞分离电动汽车的方法。可以使用通用培养基和缓冲液进行电动汽车隔离，并且仅需要分析型超速离心机即可。此外，该方法可用于获得电动车的大量再现性良好发展体外和体内实验，研究它们的生物学作用小号。
[背景]间充质干细胞（MSCs）对不同疾病的进展具有保护作用，有助于免疫调节和炎症状态（Bartholomew等，2002； Togel等，2005； Azmi等，2013； Ebrahimi等人，2013； Ben-Ami等人，2014）。它们的保护作用不仅归因于它们的转分化作用，还归因于它们的旁分泌机制，例如释放出具有免疫调节，抗炎，抗凋亡和促血管生成功能的细胞外小泡（EV）（Bruno等，2009； Camussi等）。 。，2010一个;农庄。等人，2020） ...
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| BMV Propagation, Extraction and Purification Using Chromatographic Methods
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Author:
Date:
2018-07-20
[Abstract] Brome mosaic virus (BMV) is a well-known plant virus representing single-stranded RNA (ssRNA) positive-sense viruses. It has been widely used as a model in multiple studies concerning plant virus biology, epidemiology and the application of viral capsids in nanotechnology. Herein, we describe a method for BMV purification based on ion-exchange and size-exclusion chromatography. The presented method is of similar efficiency to previously described protocols relying on differential centrifugation and can easily be scaled up. The resulting BMV capsids are stable and monodisperse and can be used for further applications.
[摘要] 雀麦花叶病毒（BMV）是众所周知的植物病毒，代表单链RNA（ssRNA）正义病毒。 它已被广泛用作植物病毒生物学，流行病学和病毒衣壳在纳米技术中的应用的多项研究中的模型。 在本文中，我们描述了基于离子交换和尺寸排阻色谱的BMV纯化方法。 所提出的方法与先前描述的依赖于差速离心的方案具有相似的效率，并且可以容易地按比例放大。 得到的BMV衣壳是稳定的并且是单分散的，并且可以用于进一步的应用。
【背景】纳米技术要克服的关键挑战之一是制定有效的和组织特异性的药物递送方法。植物病毒和病毒样颗粒（VLP）具有生物相容性和可生物降解性，不含对人类或动物健康有害的病原体，是合成药物载体的安全替代品，通常会激活免疫系统的不良反应或积聚在免疫系统中。身体到毒性水平。最后，病毒衣壳的生产相对便宜且快速（Ren et al。，2007; Arcangeli et al。，2014）。
Bromoviridae 家族的雀麦花叶病毒（BMV）是用作纳米颗粒载体的良好候选物，因为它显示出所有上述特征并且是研究最多的植物病毒之一（Figlerowicz，2000; Alejska et al。，2005; Urbanowicz et al。，2005; Wierzchoslawski et al。，2006; Kao vet al。 ...
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| Preparation and Analysis of Crude Autolytic Enzyme Extracts from Staphylococcus aureus
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Author:
Date:
2015-12-20
[Abstract] The metabolism of the cell surface during bacterial cell division involves synthesis and degradation of peptidoglycan (PGN), the major component of the bacterial cell wall. Bacteria have to ensure that their surface remains capable of withstanding high turgor pressures and, simultaneously, that the PGN at their surface is concealed from receptors produced by the host innate immune system. For cell separation to occur, and for PGN to be kept concealed, “old” PGN is degraded by specific PGN hydrolases, also known as autolysins, that are found at the bacterial cell surface or that are secreted into the growth medium.
Bacterial PGN hydrolases are cell wall lytic enzymes that comprise a broad and diverse group of proteins. It is often difficult to assign a specific function to a ...
[摘要] 细菌细胞分裂期间细胞表面的代谢涉及细菌细胞壁的主要组分肽聚糖（PGN）的合成和降解。细菌必须确保它们的表面能够承受高的膨胀压力，同时，它们表面的PGN被宿主先天免疫系统产生的受体所掩盖。为了发生细胞分离，并且对于PGN保持隐蔽，“老”PGN由在细菌细胞表面发现或分泌到生长培养基中的特定PGN水解酶（也称为自溶素）降解。
细菌PGN水解酶是包含广泛和多样化蛋白质组的细胞壁溶解酶。主要是因为生物体可以具有大量具有冗余活性的水解酶，并且一种水解酶可以具有多种酶活性并参与各种细胞过程（Vollmer等，2008），通常难以将特定功能分配给PGN水解酶。 。枯草芽孢杆菌35种已知或假设的PGN水解酶，而大肠杆菌（E.coli）和金黄色葡萄球菌（金黄色葡萄球菌）分别具有约16和19个PGN水解酶（Vollmer，2012; Heidrich等，2001; Singh et al。 ，2012）。
PGN水解酶可分为三大类：糖苷酶，酰胺酶和肽酶。糖苷酶切割聚糖主链，分为N-乙酰氨基葡糖苷酶和N-乙酰神经酰胺酶。酰胺酶切割肽链和聚糖链的N-乙酰神经酰胺残基之间的连接。肽酶，如内肽酶和羧肽酶能够切割PGN干肽的不同氨基酸之间的肽键。
在这里，我们描述了提取与金黄色葡萄球菌细胞壁非共价连接的PGN水解酶的方法（Vollmer，2008）。含有变性PGN水解酶的提取物的分析是通过运行Zymogram凝胶（含有粗细菌细胞壁或底物细胞的SDS-PAGE凝胶）进行的，然后将其在非变性缓冲液中温育以允许PGN水解酶复性。然后可以通过产生在细胞壁消化发生时观察到的清除条带来鉴定这些复性酶。方案分为三个步骤：A）从金黄色葡萄球菌细胞中制备粗自动提取物; ...
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