| Analysis of the Virulence of Uropathogenic Escherichia coli Strain CFT073 in the Murine Urinary Tract
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Author:
Date:
2017-02-05
[Abstract] This urinary tract infection model was used to monitor the efficacy of a new virulence factor of the uropathogenic Escherichia coli strain CFT073 in vivo. The new virulence factor which we designated TIR-containing protein C (TcpC) blocks Toll-like receptor signaling and the NLRP3 inflammasome signaling cascade by interacting with key components of both pattern recognition receptor systems (Cirl et al., 2008; Waldhuber et al., 2016). We infected wild type and knock-out mice with wildtype CFT073 and a mutant CFT073 strain lacking tcpC. This protocol describes how the mice were infected, how CFT073 was prepared and how the infection was monitored. The protocol was derived from our previously published work and allowed us to demonstrate that TcpC ...
[摘要] 该尿路感染模型被用于监测新生的致病性大肠杆菌菌株CFT073在体内的功效。我们指定含TIR的蛋白C（TcpC）的新的毒力因子通过与模式识别受体系统的关键组分相互作用来阻断Toll样受体信号传导和NLRP3炎性信号级联反应（Cirl等人）。 ，2008; Waldhuber等人，2016）。我们用野生型CFT073和缺乏tcpC的突变体CFT073菌株感染野生型和敲除小鼠。该协议描述了小鼠如何感染，如何制备CFT073以及如何监测感染。该方案源于我们以前发表的工作，并允许我们证明TcpC是一种强大的毒力因子，通过增加CFT073在尿液和肾脏中的细菌负担。此外，TcpC负责肾脓肿的发展，因为感染具有野生型但不是tcpC的缺乏CFT073突变体的小鼠引起这种并发症。
背景 尿路感染（UTIs）是全世界最常见的细菌感染（Dielubanza和Schaeffer，2011），主要是由欧洲病原大肠杆菌（UPEC）引起的（Zhang和Foxman，2003）。复发性感染率高（Dielubanza和Schaeffer，2011），抗生素抗性E的出现也有所增加。大肠杆菌菌株（Eurosurveillance editorial，2015）。因此，为了开发新的治疗剂，对宿主和细菌因子对尿路感染病理生理学的了解具有很高的相关性。
＆nbsp;鼠类UTI模型系统是主要使用的动物模型系统，用于研究UPEC分离株和细菌 ...
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| Mouse Models of Uncomplicated and Fatal Malaria
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Date:
2015-07-05
[Abstract] Mouse models have demonstrated utility in delineating the mechanisms underlying many aspects of malaria immunology and physiology. The most common mouse models of malaria employ the rodent-specific parasite species Plasmodium berghei, P. yoelii, and P. chabaudi, which elicit distinct pathologies and immune responses and are used to model different manifestations of human disease. In vitro culture methods are not well developed for rodent Plasmodium parasites, which thus require in vivo maintenance. Moreover, physiologically relevant immunological processes are best studied in vivo. Here, we detail the processes of infecting mice with Plasmodium, maintaining the parasite in vivo, and monitoring parasite levels ...
[摘要] 小鼠模型已经证明了用于描绘疟疾免疫学和生理学的许多方面的机制的效用。 最常见的疟疾小鼠模型使用啮齿动物特异性寄生虫物种伯氏疟原虫 。 yoelii 和 P。 chabaudi ，其引起不同的病理学和免疫应答，并用于模拟人类疾病的不同表现。 体外培养方法对于啮齿动物疟原虫寄生虫不是很好发展，因此需要在体内维持。 此外，生理相关的免疫过程最好在体内研究。 在这里，我们详细的感染小鼠与疟原虫，维持寄生虫体内，并监测寄生虫水平和健康参数整个感染的过程。
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| Small-scale Subcellular Fractionation with Sucrose Step Gradient
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Date:
2014-06-05
[Abstract] Here, we introduce the protocol for small-scale and simple subcellular fractionation used in our recent publication (Taguchi et al., 2013), which uses homogenization by passing through needles and sucrose step-gradient.
Subcellular fractionation is a very useful technique but usually a large number of cells are required. Because we needed subcellular fractionation of transiently-transfected cells, we developed a protocol for smaller numbers of cells. Our protocol for the subcellular fractionation is based on the protocol published by de Araújo and Huber (de Araujo et al., 2007), although substantial modifications have been made according to our experiences and information from personal communications. As optimal conditions seem to vary between cell lines, we ...
[摘要] 在这里，我们介绍了在我们最近的出版物（Taguchi等人，2013）中使用的用于小规模和简单的亚细胞分离的方案，其通过穿过针和蔗糖梯度梯度使用匀浆。
亚细胞分离是一种非常有用的技术，但通常需要大量的细胞。因为我们需要瞬时转染细胞的亚细胞分离，我们开发了用于较小数量细胞的方案。我们的用于亚细胞分级的方案基于deAraújo和Huber（de Araujo等人，2007）公布的方案，尽管根据我们的经验和来自个人通信的信息进行了实质性的修改。由于最佳条件似乎在细胞系之间不同，我们建议进一步修改方案以优化个别实验。我们的方法很简单，但足以分析通过糖基磷脂酰肌醇或其他脂质锚例如朊病毒蛋白锚定到细胞器的内在膜蛋白或蛋白质。然而，非共价连接到膜或细胞器的膜蛋白的蛋白质似乎更容易在制备过程中从细胞器中解离，并且如果这些蛋白质是研究的目的，则可能需要进一步的修饰。
不同于连续梯度，其中感兴趣的蛋白质分散在宽范围内，步梯度分级分离在小规模实验中检测相对少量的蛋白质是有利的，因为它将感兴趣的蛋白质浓缩如果使用蔗糖浓度的适当组合。
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