| Plasma Membrane Preparation from Lilium davidii and Oryza sativa Mature and Germinated Pollen
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Author:
Date:
2017-05-20
[Abstract] Pollen germination is an excellent process to study cell polarity establishment. During this process, the tip-growing pollen tube will start elongating. The plasma membrane as the selectively permeable barrier that separates the inner and outer cell environment plays crucial roles in this process. This protocol described an efficient aqueous polymer two-phase system followed by alkaline solution washing to prepare Lilium davidii or Oryza sativa plasma membrane with high purity.
[摘要] 花粉萌发是研究细胞极性的一个很好的过程。在此过程中，尖端生长的花粉管将开始延长。作为分离内外细胞环境的选择性渗透屏障的质膜在该过程中起关键作用。该方案描述了一种有效的含水聚合物两相体系，接着进行碱性溶液洗涤以制备高纯度的百合百合或水稻质膜。
背景 花粉质膜包含对花粉管生长和受精至关重要的各种蛋白质，例如受体样激酶（Wang等人，2016）和离子通道（Hamilton等人， em>，2015）。分离纯质膜（PM）是综合PM蛋白质组分析的前提。 PM制备主要有四种方法：差速离心，密度梯度离心，制备型自由流动电泳和含水聚合物两相体系。通常，差速离心通常与密度梯度离心合并，以根据其大小，形状和密度分离亚细胞组分。这种技术是快速的，但是由于细胞器密度的重叠，所得的PM产率和纯度都很低（Schindler和Nothwang，2006）。自由流动电泳和水性聚合物两相系统根据其表面性质分离膜囊泡。这两种方法可以富集PM足够纯化蛋白质组学分析（Alexandersson等人，2007）。然而，用于自由流动电泳的仪器操作复杂（Sandelius等人，1986）。相比之下，通过离心可以容易且快速地进行含水聚合物两相体系，使得该方法对PM制备更方便。 ...
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| Membrane Flotation Assay
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Author:
Date:
2015-04-05
[Abstract] Many postitive-stranded RNA viruses, such as Hepatitis C virus (HCV), highjack cellular membranes, including the Golgi, ER, mitchondria, lipid droplets, and utilize them for replication of their RNA genome or assembly of new virions. By investigating how viral proteins associate with cellular membranes we will better understand the roles of cellular membranes in the viral life cycle. Our lab has focused specifically on the role of lipid droplets and lipid-rich membranes in the life cycle of HCV. To analyze the role of lipid-rich membranes in HCV RNA replication, we utilized a membrane flotation assay based on an 10-20-30% iodixanol density gradient developed by Yeaman et al. (2001). This gradient results in a linear increase in density over almost the entire length of the ...
[摘要] 许多假性绞线的RNA病毒，例如丙型肝炎病毒（HCV），高压细胞膜，包括高尔基体，ER，马钱子树，脂滴，并利用它们复制其RNA基因组或组装新的病毒粒子。通过调查病毒蛋白如何与细胞膜结合，我们将更好地了解细胞膜在病毒生命周期中的作用。我们的实验室特别关注脂质滴和富含脂质的膜在HCV的生命周期中的作用。为了分析富含脂质的膜在HCV RNA复制中的作用，我们使用基于由Yeaman等人（2001）开发的10-20-30％碘克沙醇密度梯度的膜浮选测定。该梯度导致在梯度的几乎整个长度上密度的线性增加，并且膜颗粒基于其浮力特性在梯度中分离。为了保存裂解物中的膜，在缺乏洗涤剂的缓冲液中机械破碎细胞。将细胞裂解物加载在梯度的底部，用梯度覆盖，并且膜随着碘克沙醇梯度自我产生而浮起。膜的脂质含量和相关蛋白的浓度将决定梯度内不同膜的分离。离心后，可以从梯度的顶部取样级分，并使用标准SDS-PAGE和蛋白质印迹分析来分析感兴趣的蛋白质。
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| Purification and Fluorescent Labeling of Exosomes
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Author:
Date:
2014-04-20
[Abstract] Exosomes are small membrane vesicles of endocytic origin secreted into the extracellular environment from a variety of different cells, and are thought to play important roles in intercellular communications. Here, we provide a useful protocol to purify the exosomes released from cell lines using sucrose gradient centrifugation. In this protocol, we also applied a red-fluorescent lipophilic dye, DiI, which is incorporated in the outer membrane of exosomes. This fluorescently labeled exosomes allow us to visualize individual exosomes by a confocal laser scanning microscope.
[摘要] 外来体是从各种不同细胞分泌到细胞外环境中的内吞起源的小膜囊泡，并且被认为在细胞间通讯中起重要作用。 在这里，我们提供了一个有用的协议，以纯化使用蔗糖梯度离心从细胞系释放的外来体。 在这个协议，我们还应用红色荧光亲脂染料DiI，其被并入外来体的外膜。 这种荧光标记的外来体允许我们通过共聚焦激光扫描显微镜可视化单个外来体
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