| Detecting Spaciotemporal Transcript Accumulation in Maize by RNA In Situ Hybridization
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Author:
Date:
2021-02-20
[Abstract] RNA in situ hybridization is a method for visualizing spatiotemporal transcript accumulation in cells and tissues. The method provides clear resolution, is highly sensitive and specific, and can uncover gradients of transcript accumulation within a histologically-intact tissue, which is not possible currently with other methods for transcript detection. RNA in situ hybridization, however, is not a quantitative approach for gene expression. Protocols for RNA in situ hybridization have numerous steps that can span several days of work, complicating troubleshooting procedures. Here, we build on previously published RNA in situ hybridization protocols optimized for paraffin-embedded and sectioned maize tissue (Jackson, 1991; Long et al., 1996 ; ...
[摘要] [摘要] RNA原位杂交是一种可视化时空转录本在细胞和组织中积累的方法。该方法提供清晰的分辨率，高度灵敏和特异，并且可以揭示组织完整的组织内转录物积累的梯度，这是当前其他方法无法检测到转录物的方法。然而，RNA原位杂交不是用于基因表达的定量方法。RNA原位杂交的协议有许多步骤，可能需要花费数天的时间，从而使故障排除过程变得更加复杂。在这里，我们基于先前发布的RNA原位构建 杂交方案针对石蜡包埋和切片的玉米组织进行了优化（Jackson，1991； Long等，1996；Javelle等，2011），它提供了优化转录本检测的其他措施。
图形摘要：
RNA原位杂交的工作流程
[背景技术]在时间和空间差异基因表达允许具有相同的遗传物质的细胞呈现不同的身份。确实，基因表达的这种变化通常负责驱动整个生物体中模式或形态的进化变化（Carroll，2005）。因此，通过观察组织内天然背景下的基因表达，可以增强对发育过程的见识。诸如RT-qPCR和RNA- ...
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| Separation and Purification of Glycosaminoglycans (GAGs) from Caenorhabditis elegans
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Date:
2017-08-05
[Abstract] The nematode Caenorhabditis elegans is a popular model organism for studies of developmental biology, neurology, ageing and other fields of basic research. Because many developmental processes are regulated by glycosaminoglyans (GAGs) on cell surfaces and in the extracellular matrix, methods to isolate and analyze C. elegans GAGs are needed. Such methods have previously been optimized for other species such as mice and zebrafish. After modifying existing purification protocols, we could recently show that the nematodes also produce chondroitin sulfate, in addition to heparan sulfate, thus challenging the view that only non-sulfated chondroitin was synthesized by C. elegans. We here present our protocol adapted for C. elegans. Since the purification ...
[摘要] 线虫秀丽隐杆线虫是研究发育生物学，神经学，衰老等基础研究领域的流行模型生物。 因为许多发育过程由细胞表面和细胞外基质中的糖胺聚糖（GAG）调节，分离和分析C的方法。 线虫需要GAG。 此类方法先前已针对其他物种如小鼠和斑马鱼进行了优化。 在修改现有的纯化方案后，我们最近可以显示除了硫酸乙酰肝素外，线虫也产生硫酸软骨素，因此挑战了仅通过C合成非硫酸软骨素的观点。线虫。 我们在这里介绍我们适用于C的协议。线虫。 由于净化策略涉及非硫酸化和硫酸化GAG的分离，所以对于其他可能有利的方法也是有用的。
【背景】糖胺聚糖（GAG）是重复二糖单元的直链多糖链，其通常被硫酸根取代。除了透明质酸，其是在质膜上合成而不被锚定到任何蛋白质的非硫酸化GAG，所有其他GAG都与核心蛋白共价连接，从而形成蛋白聚糖（PG）。在PG上发现的最常见的GAG是硫酸乙酰肝素（HS）和硫酸软骨素（CS）/硫酸皮肤素，含有N-乙酰基 - 葡糖胺和N，N-乙酰基 - 半乳糖胺，分别（张，2010）。在高尔基隔室的生物合成过程中，它们是非模板驱动的过程，它们经过多种修饰，包括将葡萄糖醛酸差向异构化成艾杜糖醛酸，并在不同位置硫酸化（Bulow和Hobert，2006; ...
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| Preparation of Primary Neurons from Rat Median Preoptic Nucleus (MnPO)
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Author:
Date:
2013-12-05
[Abstract] Studying cell physiology is really important to understand their function and to determine action mechanisms taking place in these cells. Using brain slices can be sometime difficult to directly access to cells like neurons. Even if it more steps are needed to get cultured cells, this type of preparation allow a better access to neurons and provide a good way to study their basal properties. Here we describe a protocol of a short term primary neurons culture from MnPO, allowing to kept neurons in good condition to perform electrophysiological recordings.
[摘要] 研究细胞生理学对于了解其功能和确定在这些细胞中发生的作用机制是非常重要的。 使用脑切片可能有时难以直接访问像神经元这样的细胞。 即使需要更多的步骤来培养细胞，这种类型的制剂可以更好地接近神经元，并提供研究其基础性质的好方法。 在这里，我们描述了一种来自MnPO的短期原代神经元培养的方案，允许神经元保持良好的状态进行电生理记录。
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