{{'Search' | translate}}
 

Guanosine 5'-triphosphate sodium salt hydrate

鸟苷5''-三磷酸钠盐水合物

Company: Sigma-Aldrich
Catalog#: G8877
Bio-protocol()
Company-protocol()
Other protocol()

Combinations of Patch-Clamp and Confocal Calcium Imaging in Acutely Isolated Adult Mouse Amygdala Brain Slices
Author:
Date:
2018-08-05
[Abstract]  Calcium imaging is a powerful technique in the study of neuronal physiology, as it avoids the enzyme treatment on neurons and is able to study the neuronal activities in vivo. Using calcium-imaging techniques, we are able to monitor the elevation of calcium in the neuron. Furthermore, we can combine calcium imaging with other methods, like whole-cell patch clamp recordings, to detect a single cell calcium signal in brain slices. In this protocol, we describe a detailed confocal imaging method that is combined with whole-cell patch clamp configuration using brain slices (Du et al., 2017). [摘要]  钙成像是神经生理学研究中的一项强有力的技术,因为它避免了对神经元的酶处理,并且能够研究体内的神经元活动。 使用钙成像技术,我们能够监测神经元中钙的升高。 此外,我们可以将钙成像与其他方法结合起来,如全细胞膜片钳记录,以检测脑切片中的单细胞钙信号。 在该协议中,我们描述了一种详细的共焦成像方法,该方法与使用脑切片的全细胞膜片钳配置相结合(Du et al。,2017)。

【背景】几十年来,脑切片已成功用于研究突触,神经元和神经回路。许多实验操作已经应用于脑切片模型,例如药物应用,细胞内记录和光学成像。与培养的神经元相比,脑切片保留了神经元回路的许多基本功能特性。钙成像是一种广泛使用的技术,旨在表明分离的细胞和组织的细胞内钙(Ca 2 + )状态。研究脑组织中的细胞内钙可以深入了解各种生理过程,如细胞增殖,信号转导,突触可塑性和细胞死亡,因为钙浓度在这些功能中起着关键作用(Cameron et al。,2016)。钙指示剂是一种荧光分子,它与Ca 2 + ...

Optogenetic Stimulation and Recording of Primary Cultured Neurons with Spatiotemporal Control
Author:
Date:
2017-06-20
[Abstract]  We studied a network of cortical neurons in culture and developed an innovative optical device to stimulate optogenetically a large neuronal population with both spatial and temporal precision. We first describe how to culture primary neurons expressing channelrhodopsin. We then detail the optogenetic setup based on the workings of a fast Digital Light Processing (DLP) projector. The setup is able to stimulate tens to hundreds neurons with independent trains of light pulses that evoked action potentials with high temporal resolution. During photostimulation, network activity was monitored using patch-clamp recordings of up to 4 neurons. The experiment is ideally suited to study recurrent network dynamics or biological processes such as plasticity or homeostasis in a network of neurons ... [摘要]  我们研究了文化中的皮层神经元网络,并开发了一种创新的光学装置,以空间和时间精确度激发大量神经元。 我们首先描述如何培养表达channelorhodopsin的原代神经元。 然后,我们将根据快速数字光处理(DLP)投影机的工作原理来详细说明光遗传设置。 该设置能够用独立的光脉冲训练数十到数百个神经元,以高时间分辨率诱发动作电位。 在光刺激期间,使用多达4个神经元的膜片钳记录监测网络活动。 该实验非常适合研究复杂的网络动力学或生物过程,如神经元网络中的可塑性或体内平衡,当子群体由其特征(相关性,速率和大小)进行精细控制的不同刺激激活时。
【背景】光致遗传学提供以毫秒精度控制神经元活动的平均值。然而,神经元通常通过同时激活整个群体的光的闪光或通过在整个视野上的时间调制强度的光同时激活(Boyden等人,2005)。然而,存在几种空间调节光并已被用于使谷氨酸不起作用的方法(Nawrot等人,2009)或激活表达神经元的通道视紫质(ChR2)(Guo等人,2009)(用于审查刺激神经元的可用方法具有空间和时间分辨率参见Anselmi等人,2015)。
为了获得刺激的空间控制,第一种可能性是使用激光并将其光束快速移动到不同位置。例如,通过用声光偏转器偏转激光束已经实现了在不同树枝状位置处的谷蛋白解冻(Shoham等人,2005)。只有我们在有限的区域内足够缓慢地调节光强度,这个策略才可能是可行的。或者,可以使用相位或强度的光调制器来实现光的空间图案。基于相位调制的全息技术允许以三维空间精度获得图像,但是可以以仅100Hz的速率显示图案(Papagiakoumou等人,2010)。如果二维图案是足够的,则可以通过将投影仪或阵列的LED放置在样品的共轭平面中来简单地获得强度调制(Farah等人,2007; ...

Gliding Assay to Analyze Microtubule-based Motor Protein Dynamics
Author:
Date:
2017-04-05
[Abstract]  The purpose of this protocol is to provide an updated method of performing microtubule gliding assays and visualizing it using fluorescence microscopy. [摘要]  该协议的目的是提供一种更新的微管滑翔测定方法,并使用荧光显微镜对其进行可视化。

有丝分裂主轴是主导有丝分裂的蛋白质机械。有丝分裂纺锤体利用基于微管的运动蛋白来组织自身,并施加力量驱动细胞分裂。基于微管的运动蛋白使用源自ATP水解的能量产生机械工作(Coppin等人,1997)。运动蛋白以单向方式转移微管。运动的行为可以通过体外滑行测定(Tao和Scholey,2010)来观察,其中将电机固定在玻璃表面上并提供微管和ATP。然后可以使用荧光显微镜研究运动蛋白的运动性,并且可以实时观察其动态行为的细节。该更新的方案将允许使用体外微管滑动测定法(Tao等人,2006和2016)分析基于微管的运动蛋白功能。

Comments