| Efficient Agrobacterium-mediated Transformation of the Elite–Indica Rice Variety Komboka
|
|
Author:
Van T. Luu, Melissa Stiebner, Paula Emmerich Maldonado, Sandra Valdés, Didier Marín, Gerardo Delgado, Virginia Laluz, Lin-Bo Wu, Paul Chavarriaga, Joe Tohme, Inez H. Slamet-Loedin and Wolf B. Frommer,
Date:
2020-09-05
[Abstract] Genetic transformation is crucial for both investigating gene functions and for engineering of crops to introduce new traits. Rice (Oryza sativa L.) is an important model in plant research, since it is the staple food for more than half of the world’s population. As a result, numerous transformation methods have been developed for both indica and japonica rice. Since breeders continuously develop new rice varieties, transformation protocols have to be adapted for each new variety. Here we provide an optimized transformation protocol with detailed tips and tricks for a new African variety Komboka using immature embryos. In Komboka, we obtained an apparent transformation rate of up to 48% for GUS/GFP reporter gene constructs using this optimized protocol. This ...
[摘要]
[摘要 ] 遗传转化对于研究基因功能和农作物工程引入新性状均至关重要。水稻（Oryza sativa L.）是植物研究中的重要模型，因为它是世界一半以上人口的主食。其结果是，大量的转化方法已经开发了两个籼稻和粳稻米。由于育种者不断开发新的水稻品种，因此必须针对每个新品种适应转化方案。在这里，我们为使用未成熟胚的非洲新品种Komboka 提供了一种优化的转化协议，包括详细的技巧和窍门。在Komboka中，我们使用此优化方案对GUS / GFP报告基因构建体的表观转化率高达48％。该协议也适用于其他优质lite 稻品种。
[背景 ] 为植物的遗传转化的各种方法公顷一直在开发，例如穿孔（Shimamoto PEG介导的原生质体转染。等人，1989;达塔。等人，1992），生物射弹转化（Christou的等人，1991）和农杆菌-介导的转化（Slamet-Loedin 等，2014）。农杆菌介导的转化是将DNA引入植物的最广泛使用的方法之一（van Wordragen and Dons，1992）。该方法已被广泛用于研究，并已成为生物技术的关键先决条件。自从开发新的育种技术（如基因组编辑）以来，它就变得越来越重要（Char ...
|
|
|
| Laser Scanning Confocal Microcopy for Arabidopsis Epidermal, Mesophyll, and Vascular Parenchyma Cells
|
|
Author:
Date:
2017-03-05
[Abstract] Investigation of protein targeting to plastids in plants by confocal laser scanning microscopy (CLSM) can be complicated by numerous sources of artifact, ranging from misinterpretations from in vivo protein over-expression, false fluorescence in cells under stress, and organellar mis-identification. Our studies have focused on the plant-specific gene MSH1, which encodes a dual targeting protein that is regulated in its expression and resides within the nucleoid of a specialized plastid type (Virdi et al., 2016). Therefore, our methods have been optimized to study protein dual targeting to mitochondria and plastids, spatial and temporal regulation of protein expression, and sub-organellar localization, producing a protocol and set of experimental standards that ...
[摘要] 通过共焦激光扫描显微镜（CLSM）对植物中质体进行蛋白质靶向的研究可能由于许多来源的伪像而复杂化，其范围从体内蛋白质过度表达的误解，应激细胞中的假荧光，和细胞器错误识别。我们的研究集中在植物特异性基因MSH1上，其编码双重靶向蛋白，其在其表达中被调节并且位于特定质体类型的核内（Virdi等人，2016）。因此，我们的方法已被优化，以研究蛋白质双重靶向线粒体和质体，蛋白质表达的空间和时间调节和亚细胞定位，产生其他人可能对这些研究有用的方案和一组实验标准。
背景 植物中的蛋白质靶向行为受氨基末端前序列以及可影响亚组织定位行为的内部序列特征的影响（Baginsky和Gruissem，2004）。结合启动子驱动的表达空间和时间调节，蛋白质的活性可以通过时间和位置而非常精确和专一。在MSH1的情况下，这种核编码的植物特异性蛋白质是双重靶向线粒体和质体（Xu et al。，2011）。启动子特征将其表达指导到生殖，表皮和血管薄壁细胞（Virdi等人，2016）。内部蛋白质特征将其定位于线粒体和质体核，以及质体类囊体膜。使用这里描述的方法，通过激光扫描共聚焦显微镜大大促进了这些不寻常的蛋白质特征的发现。使用更传统的细分器分割方法，大部分细节将被忽略。
|
|
|
| Visualization and Quantification of Actin Dynamics in Rice Protoplasts
|
|
Author:
Date:
2013-11-05
[Abstract] Direct visualization of the organization and dynamics of the actin cytoskeleton in rice cells is essential to understand its roles in regulating rice growth and development. Visualization of actin dynamics in protoplasts transformed with actin probe is a relatively quick and simple strategy, compared to the strategy of generating stable transgenic rice plants that harbor actin probe, which is time-consuming. Here is a protocol described in details regarding transforming rice protoplasts as well as visualizing and quantifying actin dynamics in rice protoplasts, which is based on the method previously reported (Shi et al., 2013).
[摘要] 直接可视化的肌动蛋白细胞骨架在水稻细胞的组织和动态是必不可少的理解其在调节水稻生长和发展中的作用。 与产生含有肌动蛋白探针的稳定转基因水稻植物的策略相比，用肌动蛋白探针转化的原生质体中肌动蛋白动力学的可视化是相对快速和简单的策略，这是耗时的。 这里是详细描述关于转化水稻原生质体以及可视化和量化水稻原生质体中的肌动蛋白动力学的方案，其基于先前报道的方法（Shi等人，2013）。
|
|
|