| A Simple Microplate Assay for Reactive Oxygen Species Generation and Rapid Cellular Protein Normalization
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Author:
Date:
2021-01-05
[Abstract] 2',7'-dichlorofluorescein (DCF) and derivatives are commonly used as fluorescent indicators of a broad spectrum of reactive oxygen species (ROS) generation in cell-based assays. However, there are numerous challenges inherent to the utilization of DCF probes for intracellular microscopic analysis, including bleaching and probe efflux. Plate spectroscopy is comparatively simple and scalable compared to microscopy or flow cytometry-based acquisition, however is often subject to artefacts, including those introduced by thermal gradients and normalization methods. In this protocol we demonstrate a simple and sensitive plate spectrometry-based protocol utilizing the probes H2DCFDA and sulforhodamine B. The truncated sulforhodamine B assay (SRB) for cellular protein allows for a ...
[摘要] [摘要] 2'，7'-二氯荧光素（DCF）及其衍生物在基于细胞的测定中通常用作产生广泛活性氧（ROS）的荧光指示剂。然而，利用DCF探针进行细胞内显微分析存在许多固有的挑战，包括光稳定性和探针外排。与基于显微镜或基于流式细胞仪的采集相比，板式光谱仪相对简单且可扩展，但是通常会受到伪影的影响，包括通过热梯度和归一化方法引入的伪影。在此方案中，我们展示了一种使用探针H 2 DCFDA和磺基若丹明B的简单而灵敏的基于板光谱的方案。细胞蛋白的快速磺基若丹明B检测（SRB）可以对总细胞群体进行稳定的终点测量，同时还可以保留形态，可以与任何其他检测结合或并行进行以对细胞质量进行归一化，并通过显微镜评分进行补充细胞数和核数。氧化应激和归一化方法可能会增强研究细胞分化，应激或毒性的研究领域。。
图形概要：
ROS生成和细胞蛋白定量的图形概述
关键词：二氯，丹明，DCF，SRB，氧化应激，活性氧，测定
[背景]微孔板检测提供比基于显微镜的分析一个显著的优势对于吞吐量的分析设备，优化和分析时间成本。荧光探针（如2'，7'-二氯二氢荧光素二乙酸盐（H 2 ...
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| Detection of Reactive Oxygen Species in Oryza sativa L. (Rice)
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Author:
Date:
2016-12-20
[Abstract] Superoxide ions (O2-) and hydrogen peroxide (H2O2) are the reactive oxygen species (ROS) that play a significant role in regulation of many plant processes. The level of O2- ions is determined qualitatively using nitrobluetetrazolium (NBT) assay while the H2O2 is qualitatively estimated using 3,3-diaminobenzidine (DAB) and 2’,7’-dichlorodihydrofluorescein diacetate (H2DCFDA) assay. Further the aqueous content of H2O2 is estimated quantitatively using ferrous oxidation-xylenol orange (FOX) assay.
[摘要] 超氧化物离子（O 2 - ）和过氧化氢（H 2 O 2 O 2）是起重要作用的活性氧（ROS）在许多植物过程的调节。使用硝基四氮唑（NBT）测定定性地测定O 2 - 离子的水平，同时使用3,3 - 二氨基联苯胺（DAB）和2'，7'-二氯二氢荧光素二乙酸酯（H 2 N 2 DCFDA）测定。此外，使用亚铁氧化 - 二甲苯酚橙（FOX）测定定量地估计H 2 O 2 O 2的含水量。
背景 超氧化物离子和过氧化氢是在许多情况下起主要作用的活性氧分子涉及植物生长发育的过程包括非生物胁迫耐受性。为了更好地了解ROS对这些过程的调节，对不同类型ROS的定性和定量估计具有重要意义。通过由NADPH氧化酶系统介导的电子从NADPH转移到氧（O 2），产生O 2。使用NBT测定法在水稻幼苗中估计这些离子，其基于通过O将黄色NBT还原成深蓝色不溶性甲the的原理（Kaur等人，2016）。
＆nbsp; H 2是另一种作为调节不同植物过程的重要信号分子的活性氧分子。在使用DAB和H 2 DCFDA测定的水稻幼苗中定性地估计H 2 O 2 O 2的含量（Kaur等人，2016）。 DAB测定是基于DAB与H 2 O 2 O 2的反应形成深棕色聚合产物的原理，而H 2 N 2 ...
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| Localisation and Quantification of Reactive Oxygen Species and Nitric Oxide in Arabidopsis Roots in Response to Fungal Infection
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Author:
Date:
2014-10-05
[Abstract] Nitric oxide and reactive oxygen species have emerged as important signalling molecules in plants. The half-lives of NO and ROS are very short therefore rapid and precise measurements are required for the understanding biological roles of these redox active species. Various organelles and compartments generate NO and ROS thus it is important to determine precise location of these free radicals in order to understand their signalling roles. Diaminofluorescen (DAF) and fluorescent 2', 7'-dichlorofluorescein (DCF) dyes are employed to determine NO and ROS localisation. The advantage of this approach is that the dyes diffuse precisely to NO and ROS producing sites and generate fluorescence which can be detected by fluorescence- or confocal laser scanning microscopes. However, this technique ...
[摘要] 一氧化氮和活性氧在植物中作为重要的信号分子出现。 NO和ROS的半衰期非常短，因此需要快速和精确的测量来理解这些氧化还原活性物质的生物学作用。各种细胞器和隔室产生NO和ROS，因此重要的是确定这些自由基的精确位置，以了解他们的信号传导作用。使用二氨基荧光素（DAF）和荧光2'，7'-二氯荧光素（DCF）染料来确定NO和ROS定位。这种方法的优点是染料精确扩散到NO和ROS产生位点，并产生可以通过荧光或共聚焦激光扫描显微镜检测的荧光。然而，这种技术有其缺点;特别是需要建立荧光信号的特异性。因此，需要诸如cPTIO和抗坏血酸的ROS的使用清除剂来确认荧光信号的特异性，并且理想地，由于与每种方法相关的优点和缺点，理想地确认使用其它方法获得的数据（Gupta和Igamberdiev，2013 ）。在这里我们描述了一种方法来检测响应于木霉属，镰刀菌属使用DAF，气相Griess试剂测定和DCF荧光方法的感染的拟南芥根的NO和ROS产生。
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