| Auxin-mediated Protein Degradation in Caenorhabditis elegans
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Author:
Date:
2020-04-20
[Abstract] The auxin-inducible degron (AID) technology was recently adapted for use in the nematode Caenorhabditis elegans. Rapid degradation of C. elegans proteins tagged with an AID is mediated by a plant-specific F-box protein, transport inhibitor response 1 (TIR1), and occurs only in the presence of the phytohormone auxin. The first iteration of this technology elicited protein degradation in C. elegans through a naturally occurring form of auxin, indole-3-acetic acid (IAA). Here, we present a protocol that uses 1-naphthaleneacetic acid, potassium salt (K-NAA), an indole-free synthetic auxin analog. At equal concentration, K-NAA is as effective as IAA in standard nematode growth media (NGM). K-NAA is also effective in physiological buffer (M9), allowing for ...
[摘要] [摘要 ] 植物生长素诱导的德隆（AID）技术最近被用于线虫秀丽隐杆线虫。带有AID标签的秀丽隐杆线虫蛋白的快速降解是由植物特异性F-box蛋白介导的，转运抑制剂反应1 （TIR1），而且只发生在存在的植物激素生长素。第一次迭代的这项技术引起蛋白质降解C. 线虫通过一个天然存在形式的生长素，吲哚-3-乙酸（IAA）。在此，我们协议用途1-萘乙酸，钾盐（K-NAA），一个，自由吲哚合成的植物生长素类似物。在相等浓度 ，K-NAA在标准线虫生长培养基（NGM）中与IAA一样有效。K-NAA在生理缓冲液（M9）中也有效，可以进行高通量实验。K-NAA的主要优点有两个：它的光稳定性可防止光诱导的化合物在储存过程中降解以及在活细胞的荧光显微镜检查过程中产生有毒的吲哚衍生物;其次，其水溶性消除了使用乙醇溶解植物生长素化合物（一种可能混淆C 的溶剂）的需要。线虫寿命和行为分析。在这个协议中，我们描述方法降解菌的C. elegans的使用K-NAA对固体和液体介质的蛋白质，以及我们的方法分析蛋白质降解。
[背景 ] 有条件的蛋白质降解通过降解决定子是一个新兴的方法研究蛋白质功能在秀丽隐杆线虫（拔头筹而Frokjaer -詹森2019年）。现在的降解决定子的方法包括ZF1 （Armenti 等人。2014年，萨累。等，2018） ，生长素诱导型德龙（AID）（Zhang ...
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| Aldicarb-induced Paralysis Assay to Determine Defects in Synaptic Transmission in Caenorhabditis elegans
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Author:
Date:
2017-07-20
[Abstract] Aldicarb treatment causes an accumulation of acetylcholine in the synaptic cleft of the neuromuscular junction, resulting in sustained muscle activation and eventually paralysis. Aldicarb-induced paralysis assay is an easy and fast method to determine whether synaptic transmission of a C. elegans mutant of interest is altered. This assay is based on the correlation of the rate of neurotransmitter release with the rate of paralysis. In this protocol, we describe a method for simultaneously assessing the aldicarb sensitivity of animals with different genotypes.
[摘要] 涕灭威的治疗导致神经肌肉接头突触裂缝中的乙酰胆碱积聚，导致持续的肌肉活化并最终导致麻痹。 涕灭威诱导的麻痹测定是确定是否突触传播的一种简单且快速的方法。 线虫兴趣突变体被改变。 该测定是基于神经递质释放速率与麻痹率的相关性。 在该方案中，我们描述了同时评估具有不同基因型的动物的涕灭威敏感性的方法。
【背景】突触传递通过动作电位到达突触前末端而开始，这又导致神经递质的释放。释放的神经递质结合并激活突触后受体（Sudhof，2013）。 ℃。线虫运动由乙酰胆碱释放兴奋性运动神经元和GABA（γ-氨基丁酸）释放抑制运动神经元控制（Richmond和Jorgensen，1999; ...
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| Staphylococcus aureus Killing Assay of Caenorhabditis elegans
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Author:
Date:
2013-10-05
[Abstract] The Gram-positive bacterium Staphylococcus aureus is a human pathogen that displays virulence towards the nematode Caenorhabditis elegans. This property can be used to discover genes that are important for virulence in humans, because S. aureus possesses common virulence factors that are used in C. elegans and in humans to cause disease. S. aureus colonizes the C. elegans intestine, establishes an infection, and causes pathogenesis of the intestinal epithelium that ultimately kills the infected animal after 3 to 4 days (Sifri et al., 2003; Irazoqui et al., 2008; Irazoqui et al., 2010). The protocol described here is used to establish the rate of S. aureus-induced C. elegans death, which ...
[摘要] 革兰氏阳性菌金黄色葡萄球菌是一种人类病原体，对线虫秀丽隐杆线虫显示毒力。 这种性质可用于发现对人类毒力重要的基因，因为金黄色葡萄球菌具有在线虫和人类中引起疾病的常见的毒力因子。 金黄色葡萄球菌定殖线虫，建立感染，并引起肠上皮的发病机制，最终在3至4天后杀死感染的动物（Sifri等，2003; Irazoqui et al。，2008; Irazoqui et al ，，2010）。 这里描述的方案用于确定金黄色葡萄球菌诱导的秀丽隐杆线虫死亡率，其允许野生型和突变株的比较，从而最终有助于鉴定金黄色葡萄球菌毒力或C 线虫主机防御。 该测定法也可用于抗菌药物发现。
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