| Staining and Quantitative Analysis of Myelinating Oligodendrocytes in the Mouse Grey Matter
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Author:
Date:
2020-10-20
[Abstract] Oligodendrocytes generate distinct patterns of myelination throughout the CNS. Variations in myelination along axons may enable neurons to fine-tune conduction velocities and alter signal synchronisation. Here we outline a staining protocol permitting the assessment of the number and length of myelin sheaths formed by oligodendrocyte in the mouse grey matter. This protocol enables the investigation of myelination without the need for reporter mice or technically challenging protocols, aiding the investigation of factors influencing myelin production in the brain.
[摘要] [摘要] 少突胶质细胞在中枢神经系统产生不同的髓鞘形成模式。轴突髓鞘的变化可能使神经元能够微调传导速度和改变信号同步。在这里，我们概述了一个染色方案，允许评估由少突胶质细胞在小鼠灰质中形成的髓鞘的数量和长度。这一方案使研究髓鞘无需报告小鼠或技术上具有挑战性的协议，有助于研究影响大脑髓鞘生成的因素。
[背景] 少突胶质细胞在中枢神经系统（CNS）轴突周围产生绝缘的髓鞘。髓鞘通过鞘间小的无髓鞘间隙处电压依赖性钠通道的浓度加速轴突传导速度——Ranvier节点（Huxley和Stampfli，1949；Rushton，1951；Waxman，1997）。尽管少突胶质细胞遍布中枢神经系统，但并非所有轴突都有髓鞘，这表明髓鞘的形成和大小可能精确地调节动作电位速度和神经元同步性（Pajevic等人，2014）。因此，了解是什么影响少突胶质细胞产生髓鞘的数量（即一个细胞形成的鞘的数量和大小）对于理解髓鞘如何改变神经元功能很重要。
许多技术已经被发展用来分析体内少突胶质细胞的复杂形态。最初，Pio del Rio Hortega的研究使用碳酸银染色法，根据形成的髓鞘的数量和长度来识别和区分少突胶质细胞（Perez ...
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| Platelet Migration and Bacterial Trapping Assay under Flow
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Author:
Date:
2018-09-20
[Abstract] Blood platelets are critical for hemostasis and thrombosis, but also play diverse roles during immune responses. We have recently reported that platelets migrate at sites of infection in vitro and in vivo. Importantly, platelets use their ability to migrate to collect and bundle fibrin (ogen)-bound bacteria accomplishing efficient intravascular bacterial trapping. Here, we describe a method that allows analyzing platelet migration in vitro, focusing on their ability to collect bacteria and trap bacteria under flow.
[摘要] 血小板对于止血和血栓形成至关重要，但在免疫反应中也起着不同的作用。 我们最近报道了血小板在体外体外和体内感染部位迁移。 重要的是，血小板利用它们迁移的能力来收集和捆绑纤维蛋白（ogen）结合的细菌，从而实现有效的血管内细菌捕获。 在这里，我们描述了一种方法，允许分析血小板在体外的迁移，重点是它们收集细菌和捕获流动细菌的能力。
【背景】血小板是从巨核细胞释放的小的无核细胞片段，其存在于哺乳动物生物的骨髓内（Machlus和Italiano，2013）。大约7500亿血小板在人体血液中循环，不断扫描脉管系统以破坏内皮表面。在遇到内皮损伤时，血小板立即被招募在充分表征的事件级联中，包括初始血小板束缚和滚动，然后是血小板活化，粘附和扩散，最终导致纤维蛋白（ogen）依赖性聚集和随后的血栓收缩（Jackson， 2007）。血小板栓塞形成是生理性止血的主要步骤，但也是动脉粥样硬化斑块破裂后的病理性血栓形成，触发心肌梗塞或中风（Jackson，2011）。
除了在止血和血栓形成中的公认作用外，血小板还发展出多种免疫功能（Semple et al。，2011）。作为第一批招募炎症和感染部位的细胞，血小板在启动血管内免疫反应中起着重要作用（Wong et ...
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| Immunogold Electron Microscopy of the Autophagosome Marker LC3
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Author:
Date:
2017-12-20
[Abstract] Even though autophagy was firstly observed by transmission electron microscopy already in the 1950s (reviewed in Eskelinen et al., 2011), nowadays this technique remains one of the most powerful systems to monitor autophagic processes. The autophagosome, an LC3-positive double membrane structures enclosing cellular materials, represents the key organelle in autophagy and its simple visualization and/or numeration allow to draw important conclusions about the autophagic flux. Therefore, the accurate identification of autophagosomes is crucial for a comprehensive and detailed dissection of autophagy. Here we present a simple protocol to identify autophagosomes by transmission electron microscopy coupled to immunogold labeling of LC3 starting from a relatively low cell number, which ...
[摘要] 尽管早在20世纪50年代就已经通过透射电子显微镜观察了自噬（在Eskelinen等人2011年的综述中），但是现在这种技术仍然是监测自噬过程的最强大的系统之一。 自噬体是包含细胞物质的LC3阳性双层膜结构，代表了自噬的关键细胞器，其简单的可视化和/或计数允许得出关于自噬流的重要结论。 因此，准确鉴定自噬体对自噬的全面和详细的分析至关重要。 在这里我们提出一个简单的协议，以确定autophagosomes透射电子显微镜耦合LC3的免疫金标记从一个相对较低的细胞数量，我们最近开发遵循病毒介导的人类癌变期间的自噬途径。
【背景】自噬体代表了macroautophagy的关键结构，这是一种细胞胞质成分的分解代谢系统。巨自噬（或简单地自吞噬）由吞噬细胞的形成引发，所述吞噬细胞能够自身扩张吞噬细胞器和蛋白质，所述蛋白质最终闭合在螯合成分周围形成被称为自噬体的细胞器。接下来，在成熟过程中，自噬体可以与溶酶体融合以形成自溶酶体，其中被捕获的物质被位于溶酶体限制性膜中的泵降解并再循环回（Glick et al。，2010）。
由于自噬功能障碍与各种人类疾病，病毒感染，神经退行性疾病，免疫功能和癌症有关（Schneider and ...
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