| Measurement of RNA-induced PKR Activation in vitro
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Author:
Date:
2017-03-20
[Abstract] Protein kinase R (PKR) is one of the key RNA-activated sensors for innate immunity. PKR is activated by pathogenic or aberrant RNAs such as short double-stranded RNAs or those with imperfect secondary structures, as well as a reduction in the amount and number of RNA modifications. Activation of PKR may be an underlying mechanism for the pathogenesis of human diseases. In this protocol, I describe a method for studying levels of RNA-induced PKR activation in vitro.
[摘要] 蛋白激酶R（PKR）是先天免疫的核心RNA激活传感器之一。 PKR由致病性或异常RNA如短双链RNA或具有不完全二级结构的RNA激活，以及RNA修饰的量和数量的减少。 PKR的激活可能是人类疾病发病机制的潜在机制。在本协议中，我描述了一种在体外研究RNA诱导的PKR激活水平的方法。
背景 PKR是四种哺乳动物激酶之一，其响应于应激信号磷酸化真核起始因子2-α亚基（eIF2α）。 PKR主要是响应于病毒感染而激活（Holcik和Sonenberg，2005）。 PKR是识别和结合病原RNA的先天免疫的关键组成部分。 RNA与PKR的相互作用促进并稳定其二聚化。然后PKR经历自身磷酸化，随后磷酸化eIF2α以切断一般翻译，同时激活下游信号级联，包括增加的ATF4应激反应转录因子的翻译（Hinnebusch，2005）。
＆nbsp;已知PKR被短双链RNA激活（Manche等人，1992; Zheng和Bevilacqua，2004）以及具有一些不完全二级结构的RNA，例如发夹环（Bevilacqua 等人，1998）。此外，RNA生物发生缺陷，包括较低水平的m ...
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| Ex vivo Natural Killer Cell Cytotoxicity Assay
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Author:
Date:
2013-08-20
[Abstract] Natural Killer (NK) cells are cytotoxic lymphocytes that constitute a major component of the innate immune system. Immunosurveillance of the host by NK cells for malignant and virally-infected cells results in direct cytotoxicity and the production of cytokines to enhance the immune response. This protocol will describe the “gold standard” chromium release assay for measuring the target cell killing capacity of NK cells. Key features of this cytotoxicity assay are that it is performed with sorted NK cells as the effectors and any Major Histocompatibility Class I (MHC-I)-low or deficient tumor cell line can be used as the target cells.
[摘要] 天然杀伤（NK）细胞是细胞毒性淋巴细胞，其构成先天性免疫系统的主要组分。 通过NK细胞对恶性和病毒感染的细胞的宿主的免疫监视导致直接的细胞毒性和细胞因子的产生，以增强免疫应答。 该方案将描述用于测量NK细胞的靶细胞杀伤能力的"金标准"铬释放测定。 该细胞毒性测定的主要特征是其使用分选的NK细胞作为效应物进行，任何主要组织相容性I类（MHC-1） - 低或缺陷的肿瘤细胞系可以用作靶细胞。
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