| In vitro NLK Kinase Assay
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Author:
Date:
2017-11-05
[Abstract] This protocol provides step by step instructions to perform an in vitro kinase assay for nemo-like kinase. In addition, this protocol also describes an efficient method using mild lysis buffer for expression and purification of Glutathione S-transferase (GST) fusion proteins.
[摘要] 该协议提供了一步一步的指导，以进行nemo样激酶的体外激酶测定。 此外，该方案还描述了使用温和裂解缓冲液来表达和纯化谷胱甘肽S-转移酶（GST）融合蛋白的有效方法。
【背景】果蝇nemo已经被确定为在发育中的果蝇眼中光感受器簇的关键调节剂（Choi和Benzer，1994）。 据报道，nemo是不同物种间保守的。 该哺乳动物同系物是类似于Nemo的激酶（NLK）（Brott等人，1998; Rocheleau等人，1999）。 NLK是CMGC集团（CDK，MAPK，GSK3和CLK）的成员，也属于非典型的MAPK家族。 NLK通过转录因子调节多种细胞机制，所述转录因子包括在不同信号传导途径中的关键参与者TCF / LEF1，NICD和FOXO（Ishitani等人，1999; Ishitani等人， ，2010; Kim等人，2010）。 此外，最近我们已经将NLK鉴定为Yes相关蛋白（YAP）的新型激酶，YAP是Hippo途径中的共转录激活剂（Moon等人，2017）。 该协议描述了用于测量类似尼莫地来激酶活性的体外方法。
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| Metabolic Labeling of Yeast Sphingolipids with Radioactive D-erythro-[4,5-3H]dihydrosphingosine
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Author:
Date:
2013-08-20
[Abstract] Yeast sphingolipids can be metabolically labeled with exogenously added radioactive precursors. Here we describe a method to label ceramides and complex sphingolipids of Saccharomyces cerevisiae with a radioactive ceramide precursor, D-erythro-[4, 5-3H]dihydrosphingosine. This protocol is used to study the biosynthesis, transport and metabolism of sphingolipids in yeast.
[摘要] 酵母鞘脂可以用外源添加的放射性前体代谢标记。 在这里我们描述了用放射性神经酰胺前体D-赤式 - [4,5] 3 H]二氢鞘氨醇标记神经酰胺和酿酒酵母的复杂神经鞘脂的方法。 该方案用于研究酵母中鞘脂的生物合成，转运和代谢。
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