| Measuring Extracellular Proton and Anionic Fluxes in Arabidopsis Pollen Tubes
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Author:
Date:
2021-02-05
[Abstract] The ion-selective vibrating probe has been used to detect and quantify the magnitude and direction of transmembrane fluxes of several ions in a wide range of biological systems. Inherently non-invasive, vibrating probes have been essential to access relevant electrophysiological parameters related to apical growth and morphogenesis in pollen tubes, a highly specialized cell where spatiotemporal tuning of ion dynamics is fundamental. Of relevance, crucial processes to the cell physiology of pollen tubes associated with protons and anions have been elucidated using vibrating probes, allowing the identification of diverse molecular players underlying and regulating their extracellular fluxes. The use of Arabidopsis thaliana as a genetic model system posed new challenges given their ...
[摘要] [摘要]离子选择性振动探针已被用于检测和量化各种生物系统中几种离子的跨膜通量的大小和方向。固有Ñ上侵入性,振动探针已经必需访问有关在花粉管,与心尖生长和形态发生电生理参数高度专业化的细胞,其中离子动力学的时空调谐是根本。与此相关的是,已使用振动探针阐明了与质子和阴离子相关的花粉管细胞生理学的关键过程。 ,可以识别潜在分子并调节其细胞外通量。利用拟南芥作为遗传模型系统所带来的相对赋予了新的挑战LY尺寸小,不易操纵体外。在这里,我们描述了协议优化,该优化使在拟南芥花粉管中使用离子选择性振动探针成为可能,从而确保了一致且可重复的数据。Q这样的定量的方法启用表征离子转运蛋白的突变体表现型,这是不被明显形态学和生殖缺陷直接可检测的,提供了有价值的见解分子和细胞机制。可以将此处详述的用于量化细胞外质子和阴离子通量的方案调整为其他系统和物种,同时将样品制备方法应用于相关技术,从而促进对花粉管生长和发育的研究。
[背景]生物电和离子交换的对活体细胞的相关性是毋庸置疑的,具有一个功能影响的范围内的现象,从图案形成,信令和发展癌症和其他疾病(莱,2014)。多样的技术可以被用于检测动作电位,电场,胞外电流,和离子通量。然而,它们的功能评估在体内需要小号的非侵入性的方法。理想情况下,任何感兴趣的生物系统都应在尽可能少的干扰下和最生理的条件下进行研究。这些标准是由非侵入性的离子选择性振动探头,它已被用于在很宽的测量多个跨膜离子通量达到各种实验系统,包括果蝇(布朗和O'Donnell的,2016),斑马鱼(GUH的等。,2016),小鼠皮肤(孙等人,2015年),根(他等人,2015年),水蚤(Stensberg等,2014),C.线虫(Adlimoghaddam等,2014),等等。在花粉管中,使用离子选择性振动探针定量测量细胞外离子通量对于确定主要离子(尤其是Ca ...
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| Immuno-electrophysiology on Neuromuscular Junctions of Drosophila Third Instar Larva
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Author:
Date:
2021-02-05
[Abstract] Alterations in synaptic transmission are critical early events in neuromuscular disorders. However, reliable methodologies to analyze the functional organization of the neuromuscular synapses are still needed. This manuscript provides a detailed protocol to analyze the molecular assembly of the neuromuscular synapses through immune-electrophysiology in Drosophila melanogaster. This technique allows the quantification of the molecular behavior of the neuromuscular synapses by correlating the structural configuration of the synaptic boutons with their electrical activity.
[摘要] [摘要]突触传递的改变是神经肌肉疾病的关键早期事件。但是,仍然需要可靠的方法来分析神经肌肉突触的功能组织。此马努脚本提供了详细的协议,通过在免疫电分析神经肌肉突触的分子组装果蝇黑腹果蝇。该技术通过使突触钮扣的结构构型与其电活动相关联,可以量化神经肌肉突触的分子行为。
[背景]果蝇三龄幼虫的神经肌肉接头(NMJ)的功能组织在研究突触形成和功能的分子机制方面具有突出的优势(Feiguin等,2009 ; Godena等,2011; Romano等。(2014年和2015年;Strah等人,2020年),它在包括人类在内的其他物种中似乎是保守的。在这方面,果蝇NMJs的解剖组织是由多个突触钮扣构成的,这些突触钮扣是在运动轴突的最终乔木形成的。这些结构的分化和维持负责骨骼肌的神经支配,并暗示不同分子的协调作用,专门用于建立细胞接触以及释放,接收和整合神经递质信号传导所需的机制。此外,在果蝇中开发的功能强大的遗传工具以及神经系统对单个神经元的解剖学解析,提供了难得的机会,可以在可区分细胞的组织中进行全基因组范围的分子表型无偏搜索。尽管果蝇已经存在可视化神经肌肉突触建立的单独协议(Sabeva和Bykhovskaia,2017 ; Goel等人,2019 ...
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