| Induction of Epithelial-mesenchymal Transition in MDCK II Cells
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Author:
Date:
2021-02-05
[Abstract] Epithelial-mesenchymal transition (EMT) is a reversible process of epithelial cell transdifferentiation into a mesenchymal cell, that enables initiation of cell migration. EMT plays an important role in embryonic development, tissue repair and cancer metastasis. Better understanding of cellular and molecular events during EMT will not only provide novel insights on how mammalian organism develops and how epithelial tissues regenerate, but also can identify novel therapeutic targets for cancer therapy. Here we aim to provide a detailed protocol on how to induce EMT in Madin-Darby Canine Kidney (MDCK) II epithelial cell line and perform immunofluorescent staining on EMT-induced cells.
[摘要] [摘要]上皮-间质转化（EMT）是上皮细胞向分化为间充质细胞的可逆过程，能够启动细胞迁移。EMT在胚胎发育，组织修复和癌症转移中起着重要作用。更好地了解EMT过程中的细胞和分子事件，不仅将为哺乳动物生物的发育以及上皮组织的再生提供新颖的见解，而且还可为癌症治疗确定新的治疗靶标。在这里，我们旨在提供有关如何在Madin-Darby犬肾脏（MDCK）II上皮细胞系中诱导EMT并在EMT诱导的细胞上进行免疫荧光染色的详细协议。
[背景]上皮细胞的特征在于细胞可塑性，即具有采用不同细胞表型的能力（Carter等，2019； Yuan等，2019）。上皮-间质转化（EMT）是上皮细胞可塑性的一种形式。在EMT期间，上皮细胞会破坏细胞间连接，使其极性失去作用，并从鳞状，长方体或柱状变为梭形并迁移，从而获得间充质细胞的特性（Kalluri和Weinberg，2009）。EMT可以通过免疫染色和测量标志物（例如E-钙粘蛋白，ZO-1，波形蛋白，纤连蛋白和N-钙粘蛋白）的表达水平进行评估（Kalluri和Weinberg，2009）。在过去十年中在EMT研究中心大多的转录因子的作用例如，SNAIL1 / 2，ZEB1 / ...
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| Plant ARGONAUTE Protein Immunopurification for Pathogen Cross Kingdom Small RNA Analysis
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Author:
Date:
2021-02-05
[Abstract] Over the last decade, it has been noticed that microbial pathogens and pests deliver small RNA (sRNA) effectors into their host plants to manipulate plant physiology and immunity for infection, known as cross kingdom RNA interference. In this process, fungal and oomycete parasite sRNAs hijack the plant ARGONAUTE (AGO)/RNA-induced silencing complex to post-transcriptionally silence host target genes. We hereby describe the methodological details of how we recovered cross kingdom sRNA effectors of the oomycete pathogen Hyaloperonospora arabidopsidis during infection of its host plant Arabidopsis thaliana. This Bio-protocol contains two parts: first, a detailed description on the procedure of plant AGO/sRNA co-immunopurification and sRNA recovery for Illumina high throughput sequencing ...
[摘要] [摘要]在过去的十年中，已经注意到，微生物病原体和害虫将小RNA（sRNA）效应子传递到宿主植物中，以操纵植物生理学和免疫力，称为跨界RNA干扰。在此过程中，真菌和卵菌寄生虫sRNA劫持了植物ARGONAUTE（AGO）/ RNA诱导的沉默复合体，以转录后沉默宿主靶基因。我们在此描述方法学的细节，我们如何在宿主植物拟南芥感染期间恢复卵菌病原体拟南芥的跨界sRNA效应子。该生物协议包含两个部分：第一，关于植物AGO / sRNA co- 免疫纯化和sRNA回收，用于Illumina高通量测序分析。其次，我们解释了如何进行生物信息学小号斯尔纳序列分析读取可使用Galaxy服务器。原则上，该协议适用于研究来自多种宿主植物和植物相互作用（微生物）的AGO结合的sRNA。
[背景]小RNA（sRNA）可以充当病原体效应物，劫持植物ARGONAUTE（AGO）/ RNA诱导的沉默复合物（RISC），并使宿主mRNA沉默以进行感染，这种病毒被称为跨界RNA干扰的毒力机制（Weiberg等。，2015； Zeng等，2019）。分析感染期间与植物AGO结合的sRNA的库是一种选择方法，以全面了解可能通过宿主AGO / RISC起作用的植物入侵性病原体sRNA。基于抗体的植物AGO / ...
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